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新買(mǎi)的氨基柱，為啥沒(méi)有舊柱子好用呢？

閱讀：1258 發(fā)布時(shí)間：2023/10/9

新買(mǎi)的氨基柱，為啥沒(méi)有舊柱子好用呢？

在色譜分析過(guò)程中大家可能發(fā)現(xiàn)，對(duì)某些化合物而言，當(dāng)使用舊色譜柱時(shí)峰形和分離度都比較好，換新柱后會(huì)出現(xiàn)保留時(shí)間延長(zhǎng)或拖尾問(wèn)題。所謂“柱子不一定新的好！越用越好用！"產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因是：新色譜柱填料中有很多活性位點(diǎn)，對(duì)于您的樣品來(lái)說(shuō)，柱子和樣品之間需要一段“磨合期"。

新柱與樣品之間的“磨合期"

一般解決方案：打底進(jìn)樣，將新色譜柱填料中過(guò)多的活性位點(diǎn)占用。

具體操作：可連續(xù)進(jìn)樣5針低濃度樣品，一針接一針進(jìn)樣，不必等樣品峰出完再進(jìn)下一針；或者直接進(jìn)一針或幾針高濃度樣品，等待出峰穩(wěn)定之后再進(jìn)行分析檢測(cè)。

這種操作方法，我們且稱(chēng)之為“新柱的飽和鈍化"。但這并不是萬(wàn)能的處理方式。比如：氨基柱。

氨基柱常用于糖類(lèi)分析檢測(cè)，在新柱使用初期同樣會(huì)出現(xiàn)峰保留增強(qiáng)和峰拖尾的問(wèn)題，對(duì)分析的準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性存在較大影響。而因分析物性質(zhì)影響，打底進(jìn)樣難以達(dá)到吸附平衡，對(duì)活性位點(diǎn)的占位屏蔽作用不明顯，分析物仍易拖尾，如下圖：

月旭Ultimate^® HILIC NH₂，5μm

新柱對(duì)某糖分析譜圖-處理前

對(duì)此我們考慮三乙胺常用作掃尾劑以屏蔽填料中殘余硅醇基對(duì)分析物產(chǎn)生的次級(jí)吸附作用，氨丙基鍵合相新色譜柱也可使用TEA進(jìn)行預(yù)處理。以0.5%三乙胺（用磷酸調(diào)pH至2.5~3.0）：乙腈（30：70）為流動(dòng)相，0.5~1mL/min過(guò)渡沖柱30~60min，再使用分析所需流動(dòng)相充分平衡后進(jìn)樣。在此條件下，三乙胺極易與殘余硅醇基形成氫鍵，起到占位屏蔽作用且能夠快速達(dá)到吸附平衡，解決了新色譜柱對(duì)分析物因次級(jí)吸附造成的峰保留增強(qiáng)與峰拖尾問(wèn)題。色譜柱處理后譜圖如下：