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親水作用色譜法的優(yōu)點(diǎn)和常見問題
親水作用色譜法（hydrophilic interaction chromatogmaphy，HILIC）可以視為是使用含水-有機(jī)流動相的正相色譜法，因此它有時被稱為“含水正相色譜法”。親水作用色譜柱比反相色譜柱的極性更強(qiáng)，以極性很強(qiáng)的水作為B溶劑。增加水的比例會減小樣品的保留（與反相色譜法相反）。極性較強(qiáng)和電離的溶質(zhì)在親水作用色譜中的保留較強(qiáng)。在大多數(shù)的HILIC分離中，流動相中水的比例為3%-40%之間。當(dāng)水的比例大于40%時，保留一般很弱。
固定相
常規(guī)應(yīng)用于HILIC色譜的固定相有：純硅膠柱、氨基柱、酰胺基柱、兩性離子柱等。純硅膠柱有固定相不易流失的優(yōu)點(diǎn)，在使用CAD、ELSD和LC-MS檢測器時，zui受huan迎；氨基柱，在HILIC色譜中的應(yīng)用，特別適合碳水化合物（糖類）分離；兩性離子柱，不再需要使用離子對試劑，具有ji強(qiáng)的親水性，能夠有效地保留RP-LC中保留弱或不保留的強(qiáng)極性離子型化合物以及堿性藥物分子。
同樣是Silica，NH2，與用于正相色譜中的色譜柱不同，專為HILIC色譜設(shè)計(jì)的色譜柱，可以用于水-有機(jī)物的流動相中，換句話說，HILIC色譜對固定相的耐水性要求更高，否則會因固定相的水解，出現(xiàn)基線噪音大、色譜柱壽命短等問題。所以用于正相色譜中的色譜柱，不一定能用于HILIC色譜。而適用于HILIC色譜的色譜柱，可以用于正相色譜中。
HILIC的優(yōu)點(diǎn)
極性溶質(zhì)在親水作用色譜里優(yōu)先被保留，這意味著很多在反相色譜里保留很弱的物質(zhì)可以輕松地使用親水作用色譜進(jìn)行分離。
親水作用色譜有以下幾個潛在的優(yōu)點(diǎn)：
● 堿性溶質(zhì)的峰形良好；
● 有助于提高質(zhì)譜的靈敏度；
● 可以直接進(jìn)樣溶解在有機(jī)溶劑里的樣品；
● 因?yàn)榱鲃酉嗟酿ざ容^低，可以承受較高的流速。
HILIC的常見問題
與反相色譜法相比，親水作用色譜中最常見的問題應(yīng)該是不理想的峰形（前沿或者拖尾）。這正反映了親水作用色譜作為一種新的分離方法還沒有得到如RPC一樣廣泛應(yīng)用的事實(shí)。親水作用色譜可能還在使用A類硅膠作為填料。我們還需要繼續(xù)改良HILIC色譜柱以及想辦法對峰形進(jìn)行改善。
當(dāng)遇到峰形問題時，第一個嘗試的方法應(yīng)該是增加流動相中緩沖液的濃度。有些樣品要求緩沖液濃度高達(dá)100mmol/L才能得到比較好的峰形。一般情況下樣品應(yīng)該用流動相溶解，但有時為了改善峰形，可以把溶解樣品用的有機(jī)溶劑的比例增加。如果峰形還是沒有得到改善，那么就可以考慮更換柱子或者調(diào)整流動相的pH。流動相中應(yīng)該一直含有一定量的水，水的比例至少應(yīng)達(dá)到3%-5%。
在運(yùn)行質(zhì)譜檢測的時候，有些鍵合相柱會發(fā)生柱流失的問題。通常的解決辦法是改用硅膠柱或者別的鍵合相的色譜柱。有文獻(xiàn)指出，使用親水作用色譜時，某些樣品組分會與硅膠柱產(chǎn)生不可逆的結(jié)合，這時可以考慮改用鍵合相的HILIC柱。