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簡單!新一代固相金屬離子親和填料問世!

閱讀:1608        發(fā)布時間:2019/10/10
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什么是磷酸化蛋白質(zhì)

蛋白質(zhì)磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(tuán)(P04)轉(zhuǎn)移到不同種類的氨基酸上(主要包括絲氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y),從而使蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾的過程。該修飾是蛋白質(zhì)翻譯后修飾(PTM)中為重要的形式,具有顯著的生物學(xué)功能,細(xì)胞增殖和凋亡,良性發(fā)育,信號轉(zhuǎn)導(dǎo),新陳代謝,腫瘤發(fā)生等過程都有磷酸化蛋白質(zhì)的插足,研究磷酸化蛋白質(zhì)對探究生物學(xué)病變機(jī)理有著非常重要的意義。

 

富集磷酸化蛋白質(zhì)重要性

磷酸化蛋白質(zhì)具有低豐度和高動態(tài)性的特點(diǎn),因此對磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究首先需要對磷酸化蛋白樣品進(jìn)行富集,降低樣品復(fù)雜程度和提高磷酸化位點(diǎn)鑒定數(shù)目。固相金屬離子親和色譜法(IMAC)是磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究中常用的磷酸化蛋白質(zhì)富集技術(shù)之一。

 

 

Welchrom® Ti Poss (phosphate ester)

固相金屬離子親和填料

Welchrom® Ti Poss (phosphate ester) 是月旭科技推出的的新一代固相金屬離子親和填料,金屬離子Ti??鰲合在磷酸酯 (phosphate ester) 為配基的多級孔雜化整體材料上形成的親和填料,利用磷酸化基團(tuán)與固相化的Ti??的高親和力來富集磷酸化蛋白質(zhì)。磷酸化蛋白質(zhì)上的磷酸基團(tuán)中的三個氧原子分別與富集材料上的三個不同Ti??螯合以形成穩(wěn)定的八面體形的配位結(jié)構(gòu),這種配位方式提供了良好的結(jié)合能力。該填料具有吸附量大、選擇性好、成本低、適用范圍廣、操作簡單特點(diǎn)。

 

規(guī)格參數(shù)

基架名稱多面體低聚倍硅氧烷(POSS)作為單體所制備的多級孔雜化整體材料
粒徑范圍幾十微米至幾百微米
結(jié)合載量63.6 mg/g
適用樣品范圍所有含有磷酸基團(tuán)的蛋白質(zhì)和肽段
磷酸化肽段富集特異性97%
pH穩(wěn)定性強(qiáng)酸、強(qiáng)堿下均可使用
化學(xué)穩(wěn)定性常見有機(jī)溶劑下均可使用
保存條件干燥狀態(tài)下室溫保存
通用性操作步驟采用80% ACN/6% TFA水溶液作為富集溶液,這樣可以在富集過程中,很大程度上避免疏水性非磷酸化肽段的吸附。去除上清溶液后,依次用洗滌溶液A(50% ACN/6% TFA/200 mMNaCl)和溶液B(30%ACN/0.1%TFA)進(jìn)行洗滌,這樣可以da程度上洗去非特異性肽段。后采用100 μL 10%(wt%)的氨水洗脫吸附在材料上的磷酸化肽段。

 

應(yīng)用案例

 

(a)β-酪蛋白酶解液直接進(jìn)行分析的 MALDI TOF-MS譜圖和(b)Welchrom® Ti Poss材料富集后分析的MADLI TOF-MS譜圖

 

實(shí)驗(yàn)條件:0.1µg β-酪蛋白酶解液;采用80% ACN/6% TFA水溶液作為富集溶液,去除上清溶液后,依次用洗滌溶液A(50% ACN/6% TFA/200 mM NaCl)和溶液B(30%ACN/0.1%TFA)進(jìn)行洗滌,后采用100 μL 10%(wt%)的氨水洗脫吸附在材料上的磷酸化肽段。

 

圖a中,未經(jīng)過富集的β-酪蛋白酶解液樣品MALDI譜圖中,非磷酸化肽段的質(zhì)譜信號峰非常強(qiáng),嚴(yán)重影響了對磷酸化肽段的辨別。而經(jīng)過Ti??-IMAC富集,從MADLI譜圖中(圖b)可以清晰的看到磷酸化肽段以及其去磷酸化肽段的信號峰,而且?guī)缀鯖]有出現(xiàn)任何非磷酸化肽段的信號峰。證實(shí)了Welchrom® Ti Poss富集對磷酸化肽段具有良好的富集能力。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

Welchrom® Ti Poss (phosphate ester)

250mg

ATI001

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