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His鎳柱標(biāo)簽蛋白純化,就是這么簡(jiǎn)單

閱讀:7688        發(fā)布時(shí)間:2019/8/12
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簡(jiǎn) 介

 

1975年,Porath等人提出了一種新的純化方法-固定化金屬鰲合層析,利用金屬離子(Ni2+,Cu2+等)與氨基酸表面的殘基(如組氨酸的咪唑基)的配位鰲合作用,來純化與金屬離子有親和作用的蛋白質(zhì)。

組氨酸標(biāo)簽由于分子量小,幾乎不干擾靶蛋白的功能、活性和結(jié)構(gòu)而被廣泛的使用。固定的金屬離子親和層析是純化組氨酸標(biāo)簽蛋白的常用方法。

 

組氨酸標(biāo)簽蛋白的純化工具

月旭Ni親和填料Ni Tanrose 6FF(NTA)

Ni Tanrose 6FF(NTA)親和介質(zhì)是將金屬離子Ni2+鰲合在以氨三乙酸為配基的6%高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠上形成的親和層析介質(zhì)。月旭科技研發(fā)的Ni Tanrose 6FF(NTA)不僅純化純度較高,通過控制合理的Ni離子密度,結(jié)合載量可達(dá)到~40mgHis標(biāo)簽蛋白/ml介質(zhì),可以用于各種表達(dá)來源(如大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞)的組氨酸標(biāo)簽(6xHis-tagged)蛋白的純化。NTA含有四個(gè)螯合區(qū),較一般的三齒螯合劑能更好的結(jié)合Ni2+。6xHis可與Ni2+螯合,從而使His標(biāo)簽蛋白結(jié)合在Ni Tanrose 6FF(NTA)純化介質(zhì)上,未結(jié)合的蛋白被洗滌下去,結(jié)合在介質(zhì)上的蛋白經(jīng)過一定濃度的咪唑或低pH緩沖液被溫和的洗脫下來,從而得到高純度的目標(biāo)蛋白。具有載量高、選擇性好、易于再生、成本低等優(yōu)點(diǎn)。有了它,再也不用擔(dān)心完不成純化任務(wù)了。

PreCot Ni 6FF(NTA)是Ni Tanrose 6FF(NTA)的1ml和5ml預(yù)裝柱,用來純化6xHis-tagged蛋白,可以使用注射器、蠕動(dòng)泵,或者液相層析系統(tǒng)(例如AKTA或FPLC)。

 

Ni Tanrose 6FF(NTA)應(yīng)用案例

預(yù)裝柱:PreCot Ni 6FF(NTA) 5ml

樣品:含有His標(biāo)簽蛋白(大腸桿菌表達(dá))

平衡液A:50mM Tris-HCl,0.5M NaCl,20mM咪唑pH8.0

洗脫液B:50mM Tris-HCl,0.5M NaCl,0.5M 咪唑,pH8.0

流速:平衡、洗脫-1.0ml/min上樣-0.5ml/min

 

PreCot Ni 6FF(NTA)純化His標(biāo)簽蛋白的純化色譜圖

 

             1:原液

              2:流穿

              3:洗脫(100%B)

              4:原液

              5:流穿

              6:洗脫(100%B)

 

備注:1-3(樣品和平衡液中不含咪唑);4-6(樣品和平衡液中含20mM咪唑)

 

由于宿主蛋白中也存在組氨酸和/或半胱氨酸氨基酸殘基,其他的非特異性蛋白與靶蛋白一起與金屬離子親和層析填料結(jié)合,造成純化樣品純度不高。提高樣品中的咪唑濃度,組氨酸標(biāo)簽蛋白通過Ni Tanrose 6FF(NTA),可以一步純化得到85%以上純度的純化樣品。

 

    

 

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