分光光度計(jì)，簡(jiǎn)稱(chēng)光度計(jì)，又稱(chēng)光譜儀，已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。
分光光度計(jì)測(cè)量范圍一般包括波長(zhǎng)范圍為380~780 nm的可見(jiàn)光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200～380 nm的紫外光區(qū)。根據(jù)可測(cè)量波長(zhǎng)范圍的不同，分光光度計(jì)常分為：紫外分光光度計(jì)、可見(jiàn)光分光光度計(jì)（或比色計(jì)）、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。今天搜科采購(gòu)管家重點(diǎn)為您介紹的是可見(jiàn)分光光度計(jì)的選購(gòu)注意事項(xiàng)。
按照慣例，在選購(gòu)儀器之前我們先要摸清自己的需求：
你們實(shí)驗(yàn)室使用分光光度計(jì)的常規(guī)應(yīng)用有哪些？
你們對(duì)分光光度計(jì)的靈敏度有何要求？
是否多人共用一臺(tái)分光光度計(jì)？
是否需要同時(shí)測(cè)量多個(gè)樣品？
要測(cè)量樣品的體積范圍是怎樣的？
對(duì)分光光度計(jì)的使用頻率和使用時(shí)長(zhǎng)是怎樣的？
以上問(wèn)題的答案，可能會(huì)影響您對(duì)可見(jiàn)分光光度計(jì)的功能要求、靈活性要求、帶寬要求，是否需要預(yù)設(shè)程序等智能功能等等。如果使用頻率高、時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量和耐久性就有比較高的要求。
帶著這些問(wèn)題，我們來(lái)看看可見(jiàn)分光光度計(jì)產(chǎn)品都有哪些功能和特點(diǎn)，其中又有哪些是選購(gòu)時(shí)必須考慮的硬性指標(biāo)。
1、儀器的原理和主要部件
分光光度計(jì)主要由光源、單色器、樣品室、檢測(cè)器、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成。
其工作原理是：
分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線(xiàn)透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線(xiàn)被吸收。樣品對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該樣品的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測(cè)定其吸收度,即可計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區(qū)，除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定，故又稱(chēng)比色分析。
從以上原理，可以引出分光光度計(jì)最重要的配件——比色杯。
比色杯按照材質(zhì)大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根據(jù)不同的測(cè)量體積，有比色杯和毛細(xì)比色杯等。
2、分光光度計(jì)的常見(jiàn)用途
可見(jiàn)分光光度計(jì)是在可見(jiàn)光區(qū)域內(nèi)對(duì)物質(zhì)做定性、定量分析。常見(jiàn)的用途有以下幾種：
?。?）比色法蛋白質(zhì)定量
比色法的測(cè)定原理是組成蛋白質(zhì)的氨基酸（如酪氨酸，絲氨酸）與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān)，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。
?。?）核酸的定量
核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率最高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。定量不同類(lèi)型的核酸，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。
?。?）OD600細(xì)菌細(xì)胞密度
實(shí)驗(yàn)室確定細(xì)菌生長(zhǎng)密度和生長(zhǎng)期，多根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和目測(cè)推斷細(xì)菌的生長(zhǎng)密度。在遇到要求較高的實(shí)驗(yàn)，需要采用分光光度計(jì)準(zhǔn)確測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長(zhǎng)的標(biāo)準(zhǔn)方法。
3.性能參數(shù)指標(biāo)
?。?）波長(zhǎng)
波長(zhǎng)范圍、波長(zhǎng)查找方式、波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度和重復(fù)性都是需要考慮的重要指標(biāo)。
波長(zhǎng)涵蓋范圍越大越好，自動(dòng)查找比手動(dòng)查找好，所示波長(zhǎng)和實(shí)際波長(zhǎng)越符合越好。
?。?）帶寬
分光光度計(jì)的帶寬很大程度上依賴(lài)于單色儀的狹縫的寬度。狹縫寬度參數(shù)，以及狹縫寬度是固定的還是連續(xù)可選的，都代表著該儀器的性能。
?。?）能測(cè)量的樣品量
樣品量也是重要的考量因素。如果比色杯容量太大，那測(cè)量珍貴樣品時(shí)是非常浪費(fèi)的?，F(xiàn)在很多光度計(jì)的樣品量都趨于微量化了。
?。?）光度準(zhǔn)確度
光度準(zhǔn)確度指實(shí)際測(cè)量的光度讀數(shù)值與真值之差?？隙ㄊ菧?zhǔn)確度越高越好。
?。?）雜散光
雜散光是光譜測(cè)量中誤差的主要來(lái)源。雜散光越小越好。
?。?）穩(wěn)定性
穩(wěn)定性是精密測(cè)量?jī)x器的硬性指標(biāo)，測(cè)量結(jié)果肯定是越準(zhǔn)確、越穩(wěn)定越好。
?。?）噪聲
噪聲肯定是越小越好，這個(gè)不用解釋。
?。?）儀器的大小
很多實(shí)驗(yàn)室空間有限，滿(mǎn)足使用要求的基礎(chǔ)上，儀器肯定是占地面積越小、重量越輕越好。
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