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新推出蛋白層析柱
閱讀：5275 發(fā)布時(shí)間：2016-11-182 、裝柱說(shuō)明
2.1 凝膠的預(yù)處理
Sephadex LH-20 為干粉，初次使用前必須進(jìn)行預(yù)處理。溶脹過(guò)程中嚴(yán)禁使用磁力攪拌， 以
免使微球破碎。
加入足夠的去離子水進(jìn)行溶脹，室溫 3 小時(shí)以上，使其充分膨脹。亦可選擇 20-50%乙醇進(jìn) 行
溶脹，溶脹不要選擇純有機(jī)溶劑。 Sephadex LH-20 樣品 1g 在水中的床體積是
4.5-5.5ml，在純乙醇中的床體積是 3.5-4.5ml。使用 Sephadex LH-20,可用 0.1M
NaOH 浸泡24小時(shí)，然后用去離子水清洗干凈。
將溶脹好的微球按照 3:1（v/v）加入水或 buffer 攪拌使其形成均勻的 75%膠懸液。如果是
重復(fù)使用的可以將 20%乙醇傾去，加水或 buffer 攪拌均勻成 75%的膠懸液。
2.2 裝柱材料及裝柱溶液
層析柱：以 GE XK16/200 或宸喬 LK15200 為例進(jìn)行進(jìn)行介紹
裝柱儀器：低壓層析系統(tǒng) 裝柱溶液：去離子水
注：所使用的材料及溶液應(yīng)與色譜操作的溫度一致；層析柱篩網(wǎng)
孔徑為 28μm（500 目）或 18μm（800 目）。
計(jì)算所需介質(zhì)的量：柱床體積為 1L 時(shí)所需 75%膠懸液約為 1*1.15/0.75=1.53L。
裝柱：
1). 檢查層析柱，確保各部件完整、干凈。安裝下柱頭，擰緊 O 型圈后，將層析柱垂直固定 在
鐵架臺(tái)上，用水平儀檢查并調(diào)整，使層析柱保持水平。
2). 層析柱中加入適量的裝柱溶液，以除去柱子中的空氣。關(guān)閉柱子出口，柱內(nèi)保留 1-2cm
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高度的裝柱溶液。
3). 用玻璃棒緊靠柱內(nèi)壁引流，將膠懸液連續(xù)倒入層析柱中，以減少氣泡的產(chǎn)生。介質(zhì)自然
沉降至體積不再變化，此時(shí)介質(zhì)和溶液出現(xiàn)分層，上層溶液*澄清。
4). 連接上柱頭至低壓層析系統(tǒng)，開(kāi)泵以一定流速排出管路中殘留的空氣，暫停系統(tǒng)，將上
柱頭安裝至層析柱上，柱頭下端距離膠面約 1cm，開(kāi)泵以 30cm/h 流速壓柱至柱床體積不
再變化。暫停系統(tǒng)，略擰松 O 型圈，向下轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)桿使下端距離膠面 0.5-1cm。
5). 擰緊 O 型圈，開(kāi)泵以zui大流速 70%壓柱 3CV 以上，至柱床體積不再變化，在界面處做
好標(biāo)記。
6). 關(guān)閉泵，關(guān)閉柱下端出口，使層析柱上端和泵斷開(kāi)，向下轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)桿，至記號(hào)處以下 0-
0.5cm 停止，關(guān)閉上接口。裝柱完成。