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MALDI-TOF測(cè)定重組人鈣調(diào)磷酸酶B亞基整體分子量

閱讀:149        發(fā)布時(shí)間:2015-7-27

鈣調(diào)磷酸酶(CN)是目前所知*依賴Ca2+/CaM 的ser/thr 蛋白磷酸酶。該酶由A、B 二亞基以1:1 的比例組成異二聚體,A 亞基(CNA)是催化亞基;B 亞基(CNB)是調(diào)節(jié)亞基,能促進(jìn)CNA 的活性。CN 在生物體免疫系統(tǒng)和細(xì)胞調(diào)亡中具有重要的生理功能。CNB 作為CN 的調(diào)節(jié)亞基,分子量小,性質(zhì)穩(wěn)定,作為基因工程藥物已經(jīng)上市。對(duì)于基因工程藥物研發(fā)和質(zhì)控,對(duì)于目標(biāo)蛋白藥物的整體分子量測(cè)定是zui基本的測(cè)試項(xiàng)目之一,在相關(guān)的生物藥物開(kāi)發(fā)的指導(dǎo)原則上也有明確規(guī)定。測(cè)定分子量通常有SDS-PAGE、GFC和MALDI-TOF 等方式。前兩者的方法通常只能判斷大致的分子量范圍,而MALDI-TOF 的測(cè)定方法快速且質(zhì)量數(shù)準(zhǔn)確度高,因此常用于研發(fā)和質(zhì)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)控制。本文使用了島津MALDI-TOF 測(cè)定了基因工程重組蛋白藥物rhCNB(重組人鈣調(diào)磷酸酶B亞基)的整體分子量。該重組蛋白含170 個(gè)氨基酸,測(cè)得19136.1 的質(zhì)子化離子,并發(fā)現(xiàn)多個(gè)多聚體離子。該方法可以快速準(zhǔn)確地測(cè)定蛋白藥物的整體分子量。

 

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