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《中國藥典》0512高效液相色譜法修訂公示稿梳理 梯度延遲體積應(yīng)對方案

閱讀:1358        發(fā)布時(shí)間:2024-1-23

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圖片包含 雪, 水, 桌子, 藍(lán)色

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導(dǎo)讀

l                      梯度延遲體積概念及對分析的影響

日程表

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2023年4月,國家藥典委員會發(fā)布“關(guān)于通則0512高效液相色譜法修訂草案的公示(第一次)”。2023年9月,國家藥典委員會發(fā)布“關(guān)于通則0512高效液相色譜法修訂草案的公示(第二次)”。

 

在公示稿中,提到如梯度微調(diào)后仍不能滿足系統(tǒng)適用性要求,通常應(yīng)考慮滯留體積(也稱延遲體積)的緣故或更換色譜柱。

圖示

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梯度延遲體積:是指從流動相混合點(diǎn)至柱入口之間的體積,影響延遲體積的參數(shù)包括泵、混合器,進(jìn)樣器,最后到色譜柱,以及連接系統(tǒng)各部件的接頭。梯度洗脫中延遲體積非常重要,特別是復(fù)雜樣品的分析,低的延遲體積具有更快的梯度響應(yīng)時(shí)間,同一樣品在同一色譜柱上能夠獲得更好的分辨率。

 

若在實(shí)際使用中與方法開發(fā)時(shí)延遲體積有較大差異,會顯著影響梯度響應(yīng)時(shí)間,從而導(dǎo)致色譜分析中分離度、保留時(shí)間、相對保留時(shí)間受到顯著影響。如在中藥特征圖譜、標(biāo)多測項(xiàng)目中相對保留時(shí)間作為常見評價(jià)指標(biāo),若相對保留時(shí)間超出規(guī)定值范圍,可以將延遲體積差異作為考慮因素。

 

l                      中國藥典、歐洲藥典及美國藥典解決思路

在本次公示稿中,提到應(yīng)考慮方法開發(fā)時(shí)的系統(tǒng)與實(shí)際使用系統(tǒng)之間滯留體積的差異,在開始梯度程序前增加一個(gè)等度平衡階段,通過調(diào)整等度階段時(shí)間來調(diào)整梯度時(shí)間點(diǎn),以與所使用的分析設(shè)備相適應(yīng)。

 

美國藥典與歐洲藥典在液相色譜法通則中均提到梯度延遲體積對梯度分析的影響,解決思路各國藥典保持一致。

 

延遲體積解決辦法

1. 選擇延遲體積接近的儀器,但標(biāo)準(zhǔn)制定時(shí)系統(tǒng)往往是未知的。

2. 更換硬件配置,但操作較為繁瑣。

3. 截止進(jìn)樣功能,島津液相色譜工作站內(nèi)置設(shè)置截止環(huán)模式,操作簡便。

圖形用戶界面, 應(yīng)用程序

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4. 調(diào)整梯度起點(diǎn)功能,島津液相色譜工作站可選擇進(jìn)樣前和進(jìn)樣后兩種模式,操作簡便。

圖形用戶界面, 文本, 應(yīng)用程序, 電子郵件

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典型應(yīng)用案例

1、梯度起始點(diǎn)調(diào)整(進(jìn)樣前)  遠(yuǎn)志配方顆粒特征圖譜

手機(jī)屏幕截圖

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表格

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從遠(yuǎn)志配方顆粒驗(yàn)證結(jié)果看,標(biāo)準(zhǔn)模式下,峰4實(shí)測RRT偏差大于標(biāo)準(zhǔn)要求的±10%。梯度起點(diǎn)調(diào)整(進(jìn)樣前500 µL)后,峰4實(shí)測RRT偏差小于±10%,且其他峰結(jié)果更優(yōu)。

 

2、梯度起始點(diǎn)調(diào)整(進(jìn)樣后)  野菊花配方顆粒特征圖譜

手機(jī)屏幕的截圖

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表格

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標(biāo)準(zhǔn)模式下,實(shí)測RRT偏差在 -9.77~0.24%之間。梯度起點(diǎn)調(diào)整后,實(shí)測RRT偏差在 -6.74~0.12%之間,RRT得到改善。

 

3、截止環(huán)功能進(jìn)樣   首烏藤配方顆粒特征圖譜

圖表

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圖片包含 表格

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正常進(jìn)樣條件下,峰1的RRT大于10%,使用截止環(huán)進(jìn)樣后所有峰的RRT均在±10%之內(nèi),符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

 

本文內(nèi)容非商業(yè)廣告,僅供專業(yè)人士參考。

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