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島津二維液相色譜新應用|流動相含離子對試劑的化藥雜質質譜鑒定方法

閱讀:1102        發(fā)布時間:2021-10-8

 

離子對試劑:

極性藥物分析繞不開的話題

 

液相色譜是藥物雜質含量測定和有關物質分離分析常用的技術手段。對一個陌生的化合物,ODS反相色譜柱通常方法開發(fā)條件會選擇酸性pH流動相。然而,總有些化合物,它們或含氨基、或含羧基、磺酸基團、磷酸基團,極性較強在反相色譜柱上沒有保留。打開2020版《中國藥典》第二部,不難發(fā)現(xiàn)這些品種,名稱中常含有“馬拉酸”、“鹽酸”、“堿”、“酸”等關鍵詞。對于這類強極性化合物的分析,藥典給出的答案是:流動相中添加離子對試劑。例如丁溴東莨菪堿、貝敏偽麻的有關物質流動相條件中含有十二烷基硫酸鈉;馬來酸曲美布汀的流動相含有戊烷磺酸鈉;鹽酸頭孢吡肟的流動相含有辛烷磺酸鈉;葉酸、頭孢美唑和對氨基水楊酸鈉的流動相含有四丁基氫氧化銨。離子對試劑的添加,增強了極性化合物的保留,改善了藥物與雜質的分離,是極性藥物分析的*。

 

離子對試劑:

“質譜不能承受之重”

 

辛烷磺酸鈉和四丁基硫酸氫銨等常用離子對試劑,屬于不揮發(fā)鹽類,質譜響應強且信號經(jīng)久不衰,持續(xù)抑制目標化合物的電離。一旦誤操作進入質譜端,需要清洗整個離子通路才能恢復質譜的正常狀態(tài)。常規(guī)二維液相在線除鹽系統(tǒng)僅能去除無機鹽,無法去除離子對試劑。這是因為無機鹽(如磷酸鹽)在二維反相色譜柱上無保留,在死時間將其切至廢液從而實現(xiàn)在線除鹽。然而離子對試劑具有較強的疏水性,在常規(guī)ODS色譜柱上強烈吸附顯著拖尾,因此不能被常規(guī)二維液相系統(tǒng)去除。

 

  

上圖是辛烷磺酸鈉在ESI離子源上的響應??缮纱仉x子,質譜響應強且持久,對ESI正負模式均可產(chǎn)生抑制。

  

上圖是四丁基硫酸氫銨在ESI離子源正模式的響應,質譜響應強且持久。四丁基硫酸氫銨與固定相強烈作用,色譜上呈現(xiàn)顯著拖尾。

 

ReDual:一款可以同時分離無機、

有機、陰、陽離子的“神柱”

 

ReDual系列色譜柱,是島津公司最新推出的離子交換反相混合鍵合相色譜柱,共分為三款:

 

ReDual™ SCX-C18 強陽離子交換+反相

ReDual™ CX-C18  弱陽離子交換+反相

ReDual™ AX-C18  強陰離子交換+反相

 

下圖是采用ReDual AX-C18 (4.6 mm I. D. × 150 mm L., 5 µm,貨號426-45415)分析磷酸二氫鈉、四丁基硫酸氫銨和卡絡磺鈉混合樣品的色譜圖。該款色譜柱表面鍵合叔胺基團,在pH 2-7范圍內(nèi)色譜柱表面帶陽離子。除疏水作用外,其對陰離子具有離子交換作用,對陽離子具有離子排斥作用。為分離極性類似的陽離子和陰離子型化合物提供了條件。下圖中四丁基氨根離子峰型對稱,不拖尾無殘留,可以通過閥切換導入廢液實現(xiàn)在線去除。

 

  

ReDual AX-C18色譜柱NQAD檢測器同時分離無機有機陰陽離子(1:Na+;2:四丁基氨根離子;3:H2PO3-;4:卡絡磺酸根離子)

 

應用案例:

卡絡磺鈉參比制劑中雜質結構鑒定

 

本應用采用常規(guī)中心切割二維液相系統(tǒng),無需改造儀器;餾分轉移過程配有紫外檢測器監(jiān)控,不存在檢測盲區(qū);離子對試劑的去除未使用強酸或強堿性試劑;方法耐用性好。一維使用C18反相色譜柱,流動相添加磷酸二氫鈉(含四丁基硫酸氫銨,pH 3.0);二維使用ReDual AX-C18色譜柱,在線去除四丁基硫酸氫銨和磷酸二氫鈉,實現(xiàn)目標化合物的質譜鑒定。

 

 

 

 

  

卡絡磺鈉雜質2的質譜鑒定結果

 

總結

島津中國創(chuàng)新中心搭載的特色中心切割二維色譜雜質鑒定系統(tǒng),二維使用島津公司最新推出的ReDual™ AX-C18強陰離子交換反相混合鍵合相色譜柱,成功實現(xiàn)一維流動相中離子對試劑和無機鹽的在線去除,并對卡絡磺鈉參比制劑中未知雜質進行了質譜鑒定。

 

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