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超臨界流體色譜實(shí)戰(zhàn)(二)丨迭加進(jìn)樣

閱讀:745        發(fā)布時(shí)間:2020-12-22


摘要

 

制備工藝被廣泛地應(yīng)用于許多領(lǐng)域,如從新合成的化合物中選擇性地篩選候選化合物或先導(dǎo)化合物,或用于對(duì)藥物中的雜質(zhì)、天然物質(zhì)中具有特定功能的組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。制備型超臨界流體色譜(簡(jiǎn)稱制備SFC)具有分析時(shí)間短、后處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),在醫(yī)藥工業(yè)和許多其他領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。對(duì)于色譜峰數(shù)量有限的分析,如手性異構(gòu)體的分離,“迭加進(jìn)樣”可以提高制備純化的效率。本報(bào)告描述了一個(gè)使用Nexera UC 制備型超臨界流體色譜儀的“迭加進(jìn)樣”功能來(lái)提高制備操作效率的實(shí)例。

 

關(guān)鍵詞: 制備型SFC,迭加進(jìn)樣

 

 

1使用SFC以縮短分析時(shí)間

 

由于超臨界二氧化碳的低粘度和高擴(kuò)散系數(shù),即使在高流速下,SFC的色譜柱壓也很低。這意味著可以在不犧牲色譜柱效的情況下提高分析速度。因此,其分析時(shí)間比高效液相色譜法要短得多。    

 

以?shī)W美拉唑的手性分離為例,使用制備LC和制備SFC所需時(shí)間的對(duì)比如圖1所示,制備型SFC所用時(shí)間僅為制備型LC消耗時(shí)間的1/4,提升了分析效率。

 

 

.1 HPLC與SFC對(duì)奧美拉唑手性拆分的比較(制備型)

 

 

1 分析條件

 

2迭加進(jìn)樣

 

“迭加進(jìn)樣”是一種標(biāo)配于SIL-40自動(dòng)進(jìn)樣器和FRS-40餾分收集器的連續(xù)進(jìn)樣技術(shù),其利用色譜峰保留的時(shí)間間隔持續(xù)進(jìn)樣,從而節(jié)約分析時(shí)間提高分離效率,其工作原理如圖2所示。在進(jìn)行“迭加進(jìn)樣”設(shè)置時(shí),需要特別注意以下幾點(diǎn):

 

 僅適用于等度分析

 色譜峰之間不會(huì)相互重疊

 

 

.2 “迭加進(jìn)樣”工作原理

 

3“迭加進(jìn)樣”設(shè)置方法

 

“迭加進(jìn)樣”功能可以在LabSolutions工作站軟件中輕松設(shè)定。通過(guò)設(shè)定“進(jìn)樣間隔”、“進(jìn)樣次數(shù)”和“等待下一次預(yù)處理的時(shí)間”等參數(shù)(圖3),并使用單次運(yùn)行結(jié)果(色譜圖)模擬給定進(jìn)樣間隔的結(jié)果(圖4),可以很容易地確認(rèn)是否存在色譜峰重疊。若要連續(xù)進(jìn)樣,則必須設(shè)定適當(dāng)?shù)牡却龝r(shí)間,以便樣品從樣品環(huán)(圖5)中流出后,樣品環(huán)可以切換回LOAD狀態(tài)(圖5的右側(cè))。  

 

 

 

.3 設(shè)定“迭加進(jìn)樣”參數(shù)(用于圖4)

 

 

.4 “迭加進(jìn)樣”模擬結(jié)果 (LabSolutions)

 

 

.5 樣品閥動(dòng)作 (FRS-40)

 

對(duì)于數(shù)據(jù)采集時(shí)間,輸入一個(gè)大于單次分析時(shí)長(zhǎng)且加上進(jìn)樣間隔和進(jìn)樣次數(shù)的乘積。例如,以0.8分鐘的進(jìn)樣間隔連續(xù)進(jìn)樣9次,則輸入值至少為單次分析時(shí)長(zhǎng)加上7.2分鐘(圖6)。

 

 

.6 數(shù)據(jù)采集時(shí)間 (SPD-M40)

 

 

在每次進(jìn)樣周期后將分餾閥返回其初始位置,則可以在同一瓶中收集相同的峰。因此,“迭加進(jìn)樣”方式可將同一化合物的所有峰收集在同一個(gè)收集瓶中。餾分收集將依據(jù)時(shí)間程序進(jìn)行,僅需輸入單次分析的時(shí)間程序,隨后工作站即可以自動(dòng)地根據(jù)進(jìn)樣間隔計(jì)算出餾分收集時(shí)間(圖7和8)

 

 

.7 “迭加進(jìn)樣”的復(fù)位時(shí)間

 

.8 復(fù)位時(shí)間與制備間隔的關(guān)系

 

 

4“迭加進(jìn)樣”用于手性樣品分離

 

以下介紹一個(gè)實(shí)際使用“迭加進(jìn)樣”分離手性藥物的案例,樣品為10mg/mL華法林溶液(甲醇)。分析條件如表2所示,所得色譜圖如圖9所示。結(jié)果表明,在10.5分鐘的分析時(shí)間內(nèi),進(jìn)樣次數(shù)可由常規(guī)進(jìn)樣的3次增加到“迭加進(jìn)樣”的9次,提高了制備操作的效率。

 

 

2 分析條件

 

.9 華法林分離實(shí)例

 

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