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2020版《中國藥典》│ 島津柱切換二維液相,助您輕松應(yīng)對“0722維生素D測定法”

閱讀:391        發(fā)布時間:2020-7-24


 

 

維生素D是一種脂溶性維生素,其具有促進(jìn)生長和骨骼鈣化,促進(jìn)牙齒健全、用于治療佝僂病、骨軟化癥等功能作用,是一種大家廣為熟知的營養(yǎng)元素。《中國藥典》2020年版《0722維生素D測定法》,保留原先的第一、二、三法外,新增加了第四法——柱切換二維液相法。

 

本次,小編和您一起探討新加入的第四法。

 

 什么是柱切換二維液相法?

 

柱切換二維液相法是將不同選擇性分離柱組合,加強(qiáng)分離能力的聯(lián)用技術(shù)。柱切換液相色譜系統(tǒng)通常由第一維分離柱和第二維分離柱串聯(lián)組成,兩柱之間以切換閥作為接口,通過流動相流路的改變,將部分或全部第一維柱流出的組分,導(dǎo)入第二維柱進(jìn)行二次分離,從而起到凈化目標(biāo)化合物,提高系統(tǒng)分離能力的作用。如果只是將部分組分導(dǎo)入第二維柱分析,通常又稱為中心切割二維液相法,用LC+LC表示;如果是全部組分全部導(dǎo)入第二維柱,通常稱為全二維液相色譜法,用LC×LC表示。

 

 新增加的第四法,優(yōu)點(diǎn)有哪些?

 

《中國藥典》2020年版四部《0722維生素D測定法》,采用高效液相色譜法測定維生素D制劑中所含維生素D含量,以及維生素AD制劑或魚肝油中所含維生素D及前維生素D(折算成維生素D)的總量。

 

•當(dāng)待測藥品中無維生素A及其他雜質(zhì)干擾可用第一法測定,否則應(yīng)按第二法處理后測定;

 

•如果按第二法處理后,前維生素D峰仍受雜質(zhì)干擾,僅有維生素D峰可以分離時,則應(yīng)按第三法測定,或不經(jīng)前處理按第四法測定。第二法和第三法的供試液制備需要采用“正相收集、反相洗脫”,第三法為了進(jìn)一步去除前維生素D峰的雜質(zhì)干擾,還增加了水浴加熱再凈化的過程,前處理較為麻煩,一個實(shí)驗(yàn)常常需要2~3天時間來完成;

 

•第四法通過在線凈化的方式,省去了復(fù)雜的前處理步驟,讓儀器來代替復(fù)雜的人工操作!且相比較而言,第四法的儀器配置更為簡單,是藥品中維生素D檢測的不錯選擇!

 

 島津應(yīng)對方案

 

該方案在島津中心切割二維液相系統(tǒng)上進(jìn)行。系統(tǒng)配置包括一維二元高壓系統(tǒng)和二維四元低壓系統(tǒng),兩個紫外檢測器,一個進(jìn)樣單元和一個柱溫箱;柱溫箱中裝載兩根不同性能的色譜柱,并通過加載一個高壓流路切換閥實(shí)現(xiàn)一維和二維的實(shí)時切換。

 

 

 

1. 島津二維液相(中心切割)系統(tǒng)

 

 01 前處理:

按照《中國藥典》2020年版四部通則0722維生素D測定法第四法要求進(jìn)行制備。

 

 02 分析條件:

第一維色譜柱:HILIC-10(2.1x150 mm,3 µm)

第二維色譜柱:RX-SIL(3.0x100 mm,1.8 µm)

第一維流動相:A相:正己烷;

B相:正己烷-正戊烷-異丙醇(98:1:1);

按下表程序進(jìn)行梯度洗脫

 

 

 

第二維流動相:正己烷-正戊醇-異丙醇(996:2:2),等度洗脫

流速:0.5 mL/min                

進(jìn)樣體積:100 µL

柱溫:40℃                             

檢測波長:265 nm

收集管:聚醚醚酮(peek)管,內(nèi)徑0.0762 cm(0.03英寸),20 m,容積約9 mL

 

 03 對照品溶液色譜圖:

取方法中的校正因子f2上機(jī)測試,得到對照品溶液色譜圖。其中第一維液相維生素D的理論塔板數(shù)超過2500,與前維生素D的分離度>5;各峰的重復(fù)性為0.76%~1.46%(n=5),均滿足藥典的要求。

 

 

2. 對照品溶液第一維色譜圖(上)和第二維色譜圖(下)

 

 04 供試品溶液色譜圖:

取制備好的供試品溶液上機(jī)分析。在第一維色譜圖中,由于維生素A醇和油脂的干擾,前維生素D被大量雜質(zhì)峰包裹,無法檢測;將該時間段的物質(zhì)切入第二維色譜中繼續(xù)分析,前維生素D和維A醇、油脂等雜質(zhì)在第二維色譜圖中得到了有效的分離。

 

 

 

3. 供試品溶液第一維色譜圖(上)和第二維色譜圖(下)

 

 05 參與驗(yàn)標(biāo)工作:

島津廣州分析中心參與了該方法的驗(yàn)標(biāo)工作;制標(biāo)專家和島津工程師共同建立并驗(yàn)證了方法,方法可靠、穩(wěn)定,可有效地應(yīng)對《中國藥典》0722通則第四法柱切換色譜法。

 

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