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液相色譜儀有多種不同的分離機制
閱讀：1956 發(fā)布時間：2019-9-4
液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。具有、快速、靈敏等特點。廣泛應用于生物化學、生物醫(yī)學、環(huán)境化學、石油化工等部門。
按照分離機制不同，液相色譜可分為液-液色譜法、液-固色譜法、離子交換色譜法、離子對色譜法和空間排除色譜法等。
(1) 液-液色譜
又稱液-液分配色譜。在液-液色譜中，一個液相作為流動相，另一個液相則分散在很細的惰性載體或硅膠上作為固定相。根據(jù)固定相和流動相的極性不同可分為正相色譜法和反相色譜法。
正相色譜法——流動相極性小于固定相極性，即采用極性鍵合相，用非極性或極性小的溶劑（如烴類）并加入適量的極性溶劑（如氯仿、醇等）為流動相，常用于分離中等極性化合物（如脂溶性維生素、甾族、芳香醇、芳香胺、脂、有機氯農(nóng)藥等）。
反相色譜法——流動相極性大于固定相極性，即采用極性很小的鍵合固定相，用強極性溶劑為流動相（如甲醇/水，乙*/水，水和無機鹽的緩沖溶液等），多用于分離多環(huán)芳烴等低極性化合物。
(2) 液-固色譜
固定相為固體吸附劑，根據(jù)物質(zhì)在固定相上的吸附作用不同來進行分離。常用的固定相是表面多孔和全多孔微粒型硅膠、氧化鋁等，一般采用5~10μm的全多孔型微粒。其特別適用于非離子的、不溶于水的化合物以及幾何異構體的分離。
(3) 離子交換色譜法
固定相為離子交換劑，常用基質(zhì)為合成樹脂及硅膠兩種，流動相為鹽類的緩沖液。當流動相帶著組分電離生成的離子通過固定相時，組分離子與樹脂上可交換的離子基團進行可逆變換，根據(jù)組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。離子交換色譜主要是用來分離離子或可離解的化合物。它不僅廣泛地應用于無機離子的分離，而且廣泛地應用于有機和生物物質(zhì)，如氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等的分離。
(4) 離子對色譜法
將一種（或數(shù)種）與溶質(zhì)分子電荷相反的離子（稱為對離子或反離子）加到流動相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結合形成離子對，從而控制離子的保留值的色譜法。離子對色譜法也可分為正相離子對色譜法和反相離子對色譜法，其中反相離子對色譜法應用較多，它是以非極性烷基鍵合相為固定相，含低濃度反離子的水溶性緩沖溶液為流動相，適用于極性較小的樣品分離。
(5) 空間排阻色譜法
空間排阻色譜法是按分子尺寸的差異進行分離的一種液相色譜法，也稱凝膠色譜法。其固定相是一種表面惰性，含有許多不同尺寸的孔穴或立體網(wǎng)狀物質(zhì)，流動相是可以溶解樣品的溶劑，它的選擇決定于固定相類型?？臻g排阻色譜可用于分離相對分子質(zhì)量大的分子（如蛋白質(zhì)、核酸等）。
按照分離機制不同，液相色譜可分為液-液色譜法、液-固色譜法、離子交換色譜法、離子對色譜法和空間排除色譜法等。
(1) 液-液色譜
又稱液-液分配色譜。在液-液色譜中，一個液相作為流動相，另一個液相則分散在很細的惰性載體或硅膠上作為固定相。根據(jù)固定相和流動相的極性不同可分為正相色譜法和反相色譜法。
正相色譜法——流動相極性小于固定相極性，即采用極性鍵合相，用非極性或極性小的溶劑（如烴類）并加入適量的極性溶劑（如氯仿、醇等）為流動相，常用于分離中等極性化合物（如脂溶性維生素、甾族、芳香醇、芳香胺、脂、有機氯農(nóng)藥等）。
反相色譜法——流動相極性大于固定相極性，即采用極性很小的鍵合固定相，用強極性溶劑為流動相（如甲醇/水，乙*/水，水和無機鹽的緩沖溶液等），多用于分離多環(huán)芳烴等低極性化合物。
(2) 液-固色譜
固定相為固體吸附劑，根據(jù)物質(zhì)在固定相上的吸附作用不同來進行分離。常用的固定相是表面多孔和全多孔微粒型硅膠、氧化鋁等，一般采用5~10μm的全多孔型微粒。其特別適用于非離子的、不溶于水的化合物以及幾何異構體的分離。
(3) 離子交換色譜法
固定相為離子交換劑，常用基質(zhì)為合成樹脂及硅膠兩種，流動相為鹽類的緩沖液。當流動相帶著組分電離生成的離子通過固定相時，組分離子與樹脂上可交換的離子基團進行可逆變換，根據(jù)組分離子對樹脂親合力不同而得到分離。離子交換色譜主要是用來分離離子或可離解的化合物。它不僅廣泛地應用于無機離子的分離，而且廣泛地應用于有機和生物物質(zhì)，如氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等的分離。
(4) 離子對色譜法
將一種（或數(shù)種）與溶質(zhì)分子電荷相反的離子（稱為對離子或反離子）加到流動相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結合形成離子對，從而控制離子的保留值的色譜法。離子對色譜法也可分為正相離子對色譜法和反相離子對色譜法，其中反相離子對色譜法應用較多，它是以非極性烷基鍵合相為固定相，含低濃度反離子的水溶性緩沖溶液為流動相，適用于極性較小的樣品分離。
(5) 空間排阻色譜法
空間排阻色譜法是按分子尺寸的差異進行分離的一種液相色譜法，也稱凝膠色譜法。其固定相是一種表面惰性，含有許多不同尺寸的孔穴或立體網(wǎng)狀物質(zhì)，流動相是可以溶解樣品的溶劑，它的選擇決定于固定相類型?？臻g排阻色譜可用于分離相對分子質(zhì)量大的分子（如蛋白質(zhì)、核酸等）。