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細胞培養(yǎng)操作

閱讀:878      發(fā)布時間:2024-6-24
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細胞系(cell line)指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后所繁殖的細胞群體。 也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。(由此便引申出了后來的有限細胞系(FiniteCellLine)、無限細胞系(InfiniteCellLine)),因此,細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞(特定環(huán)境下口語和書面語都使用),廣義是指可傳代的細胞。
細胞傳代:
a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min(視細胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000rpm離心5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 
細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000rpm條件下離心4min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱,24h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
復蘇細胞:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000rpm條件下離心3min,棄去上清液,加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

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