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蛋白純化注意事項(xiàng)

閱讀:1911      發(fā)布時(shí)間:2021-6-16
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1.  選擇表達(dá)載體時(shí),要根據(jù)所表達(dá)蛋白的最終應(yīng)用考慮。如為方便純化,可選擇融合表達(dá);如為獲得天然蛋白,可選擇非融合表達(dá)。
 
2.  融合表達(dá)時(shí)在選擇外源DNA同載體分子連接反應(yīng)時(shí),對(duì)轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯過(guò)程中密碼結(jié)構(gòu)的閱讀不能發(fā)生干擾。

3.  菌液OD值要小于1,否則細(xì)胞太濃太老,不易破碎,且質(zhì)粒易丟失。

4.  誘導(dǎo)時(shí)間最好做一個(gè)梯度,不同蛋白誘導(dǎo)時(shí)間需摸索。

5.  誘導(dǎo)溫度適當(dāng)摸索:25、30℃。

6.  IPTG濃度:一般在1 mM 以?xún)?nèi),可適當(dāng)摸索。

7.  超聲條件可視實(shí)際情況改變,只要使菌體裂解充分即可,即菌液清亮不粘稠。

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