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月餅類糕點(diǎn)中黃曲霉毒素B1的檢測(cè)方法

閱讀:1836        發(fā)布時(shí)間:2015-8-24

黃曲霉毒素是一種肝臟毒素,對(duì)人和許多動(dòng)物都有*的致癌性,其中黃曲霉毒素B1毒性zui大,致癌性zui強(qiáng)。因此,食品中黃曲霉毒素B1的檢測(cè)是非常重要的。下面介紹的分離及測(cè)定黃曲霉毒素的方法——固相酶聯(lián)免疫法是常規(guī)分析中常用的一種重要方法。

一、 原理

CSY-E96H黃曲霉毒素快速檢測(cè)儀 (黃曲霉素快速檢測(cè)儀|黃曲霉素檢測(cè)儀|黃曲霉毒素測(cè)試儀)采用固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA的原理,即酶聯(lián)免疫法;可定量檢測(cè)糧食、食品、飼料、油脂、乳制品、藥物、飲料、牛奶、酒等產(chǎn)品中的黃曲霉毒素(B1,B2,G1,G2 M1  M2 AFM1、AFP1、AFQ1、AFB1-2,3-環(huán)氧化物)含量。

快速檢測(cè)實(shí)驗(yàn)操作所需的試劑及材料:微孔板 包被有AFB1-BSA;5個(gè)濃度的AFB1標(biāo)準(zhǔn)溶液各(1mL)可直接使用;標(biāo)準(zhǔn)10ng/mL 可直接使用;標(biāo)準(zhǔn)

21.0ng/mL可直接使用;標(biāo)準(zhǔn)

32.0ng/mL 可直接使用;標(biāo)準(zhǔn)

45.0ng/mL可直接使用;標(biāo)準(zhǔn)

510.0ng/mL 可直接使用;AFS單克隆抗體溶液(6mL)可直接使用;酶標(biāo)物(12mL)可直接使用;顯色液(12mL);終止液(6mL);濃縮洗液(30mL) ;空白對(duì)照(6ml)微孔板酶標(biāo)儀(450nm):定量分析用;振蕩器,粉碎機(jī),微量移液器,量筒,漏斗和容量瓶,快速定性濾紙;試劑:氯化鈉(分析純)、甲醇(分析純)、去離子水或蒸餾水

檢驗(yàn)操作注意事項(xiàng):標(biāo)準(zhǔn)溶液中含有黃曲霉毒素,應(yīng)特別小心。使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液用pH7的次氯酸溶液(10%v/v)浸泡。終止液為0.5N硫酸,避免接觸皮膚。不要交換使用不同批號(hào)盒中的試劑。

黃曲霉毒素B1檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)樣品前處理:樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存,取5g粉碎的有代表性的樣品,加1.25g氯化鈉及25mL70% 甲醇-水,強(qiáng)力振蕩3分鐘;用快速定性濾紙過濾;取1mL濾液,用1%氯化鈉溶液稀釋10倍;取50μL稀釋液進(jìn)行分析;據(jù)需要可以增加樣品量,但甲醇溶液的量也應(yīng)相應(yīng)增加。

檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)和測(cè)定程序:每次加樣后立即將所有試劑放回2-8 ,每步操作時(shí)間控制在5min內(nèi), 孵育過程中應(yīng)避光。測(cè)定程序1. 取所需數(shù)量的板條插入微孔架,記錄樣品及標(biāo)準(zhǔn)的位置。

2. 加入50mL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣品到微孔,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭。

3. 50mL黃曲霉毒素B1單克隆抗體使用液加入到每個(gè)微孔(注意移液器管尖不要接觸到放進(jìn)孔中的液體,避免交叉污染),在適當(dāng)位置孔加空白對(duì)照液100mL37孵育90min4. 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板3min×3次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。

5. 每孔加入酶標(biāo)物100mL37孵育60min。

6. 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板3min×3次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。

7. 每孔加入顯色液100mL(2)37孵育10 min -12min

8. 每孔加入終止液50mL(1),立即用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)為450nm處測(cè)定吸光度值(OD)。

黃曲霉素B1檢測(cè)儀

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