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厭氧菌培養(yǎng)方法

閱讀:2707      發(fā)布時間:2020-3-3
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厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養(yǎng)厭氧菌,必須創(chuàng)造一個無氧的環(huán)境。通常用培養(yǎng)基中加入還原劑,或用物理、化學方法去除環(huán)境中的游離氧,以降低氧化還原電勢。如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基,牛心腦浸液培養(yǎng)基等。常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多,可根據(jù)實際情況選用。
  1.厭氧缸法接種好標本的平板或液體培養(yǎng)基試管,可放入?yún)捬醺變扰囵B(yǎng),厭氧缸是普通的干燥缸,用物理化學的方法使缸內造成厭氧環(huán)境,從而將厭氧菌培養(yǎng)出來。
  2.厭氧袋(Bio-bag)即在塑料袋內造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣,內裝氣體發(fā)生管美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后,盡量擠出袋內空氣,然后密封袋口。先折斷氣體發(fā)生管,后折斷美蘭指示劑管,命名袋內在半小時內造成無氣環(huán)境。如不突變表示袋內已達厭氧狀態(tài),可以孵育。
  3.厭氧手套箱(Anaerobie glove box)即厭氧培養(yǎng)箱,是迄今為止上*的培養(yǎng)厭氧菌佳儀器之一。它是一個密閉的大型金屬箱,箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內進行操作,故名。箱側有一交換室,具有內外二門,內門通箱內先關著。欲放物入箱,先打開外門,放入交換室,關上外門進行抽氣和換氣(H2,CO2,N2)達到厭氧狀態(tài),然后手伸入手套把交換室內門打開,將物品移入箱內,關上內門。箱內保持厭氧狀態(tài),也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理。該箱可調節(jié)溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內,還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落,這種厭氧箱適于作厭氧細菌的大量培養(yǎng)研究,大量培養(yǎng)基可放入作預還原和厭氧性無菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環(huán)境和溫度等均系自動調節(jié)。
4.厭氧盒:原理同厭氧袋,有成品銷售。
5.生物耗氧法:在一密閉的容器內放以生物(多是植物),消耗氧氣,同時產(chǎn)生二氧化碳,供細菌生長用。我沒見過。
6.焦性末食子酸法:在一潔凈的玻片上鋪上紗布或濾紙,均勻撒上焦性末食子酸,然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液,迅速將已接種細菌的平板倒扣在上面,用融化的白蠟封邊,造成一個封閉空間。焦性末食子酸與堿反應后耗氧。該法用于厭氧不嚴格的厭氧菌的培養(yǎng),簡單。如有梭狀芽孢桿菌。
7.皰肉培養(yǎng)基:本身就是一個不需特殊設備的厭氧培養(yǎng)法。皰肉和肉湯裝入大試管,液面封凡士林,造成無氧環(huán)境。
操作室厭氧環(huán)境形成:按使用要求放置好必要的配件和器具,并向操作室內放入二個無毒塑料袋。通電源開照明燈,開控溫儀,調節(jié)所需溫度及安全溫度。操作室內放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑(封閉)。關緊取樣室內外門,并抽真空校驗。操作室內次置換(氮氣置換):先用橡皮管插入操作室內進氣口,另一頭插入塑料袋。接通氮氣進氣路,打開氮氣控制閥,使二只塑料袋充足氮氣,然后扎緊袋口。把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。把塑料袋內氮氣漸漸地放于操作室內,至全部放出。操作室第二次置換(氮氣置換)重復一 次充氮過程,并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。操作室第三次置換(混合氣體置換):(混合氣體配比為:N2↑ 85% H2 ↑ 10% CO2↑ 5%)調換氣路打開混合氣道通閥門進氣,充氣時要隨時腳踏開關開閉排氣?;旌蠚獬錆M塑料袋后,關掉混合氣直通閥(三通閥),使混合氣經(jīng)過流量計輸入操作并調整流量計,流量為每分鐘10毫升左右。把塑料袋內混合氣漸漸排于操作室內。通過三次換氣后,操作室內氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。操作室內打開鈀粒除氧劑,接通除氧催化器電源進行催化除氧,一 小時后打開美蘭指示劑(美蘭安瓶)觀察其變況,不變色為操作室內達到厭氧環(huán)境。開紫外線滅菌燈,室內進行滅菌處理。滅菌時間自定。

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