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青島捷世康生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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試驗(yàn)中影響核糖核酸自溶的各種因素

時(shí)間:2015-7-1閱讀:1418
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試驗(yàn)中影響核糖核酸自溶的各種因素

溫度

高溫或低溫處理,破壞細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性,可引起RNA的自溶。在大腸桿菌溫度敏感性突變株中,因膜的熱變性,表在性的RNaseI引起滲入細(xì)胞質(zhì)中的RNA的分解。細(xì)菌核糖體的熱穩(wěn)定性與細(xì)菌的耐熱性之間有平行關(guān)系。金色鏈霉素及大腸桿菌的核糖體,因熱破壞,或者是核糖體中的RNase受熱活化,都是誘發(fā)RNA自溶的重要原因。在解酯假絲酵母中,也可以認(rèn)為在ATP存在下才起作用的蛋白質(zhì)RNase抑制劑的受熱失活,是導(dǎo)致RNA自溶的主要原因。

照射

雖然大腸桿菌或酵母通過紫外線或X-射線照射都能分泌紫外吸收物質(zhì),而RNA自溶確實(shí)第二義的現(xiàn)象。

藥物

多粘菌素、多烯類抗菌素、表面活性劑、有機(jī)溶劑等破壞細(xì)胞膜的藥物。作用于細(xì)菌、酵母、絲狀菌時(shí)會(huì)使紫外吸收物質(zhì)滲出。特別是膠球似酵母通過SDS處理,能有效分泌3(2)-核苷酸。產(chǎn)元假絲酵母用陽離子表面活性劑處理,分泌5-核苷酸(標(biāo)準(zhǔn)品

在大腸桿菌的培養(yǎng)過程中,若添加鏈霉素,初期從頭合成,后期能分泌源于RNA自溶的5-核苷酸。鏈霉素誘發(fā)分泌核苷酸的機(jī)制可以說是由于改變了細(xì)胞膜滲透性的結(jié)果??敲顾丶靶旅顾貙?duì)大腸桿菌顯示與鏈霉素同樣的效果。再者,在枯草桿菌、熒光假單胞菌中可以看到因鏈霉素作用而分泌核苷酸的現(xiàn)象。但類 鏈球菌、金色鏈球菌則沒有這種現(xiàn)象

已知用DNA合成抑制劑si裂霉素和AF-5,RAN合成抑制劑放線菌素,具有分解DNA作用的大腸桿菌素E,呼吸抑制劑氟化鈉等均有可引起RNA的自溶。但這些物質(zhì)誘發(fā)RNA自溶的機(jī)制尚未搞清。

使用EDTA檸檬酸等螯合劑使RNA自溶的現(xiàn)象是由于除去了對(duì)膜或核糖體具有穩(wěn)定作用的Mg所致

在研究產(chǎn)元假絲酵母的RNA自溶現(xiàn)象時(shí),還發(fā)現(xiàn)硼酸離子對(duì)RNA自溶有促進(jìn)作用

限制營養(yǎng)

在各種細(xì)菌中以觀察到,因缺少碳源、氨基酸、氮源、磷酸、Mg、尿嘧啶、鳥嘌呤等及缺乏全營養(yǎng),會(huì)使核糖體或rRNA自溶。關(guān)于不同的營養(yǎng)限制條件,都引起核糖體分解的同樣結(jié)果。Erlich等人認(rèn)為,限制營養(yǎng)條件是引起核糖體分解的統(tǒng)統(tǒng)信號(hào),并推測了那個(gè)信號(hào)是細(xì)胞內(nèi)核苷多林算量的減少。其后的很多研究成果,如酵母的核糖體,為ATP所穩(wěn)定的現(xiàn)象,濃味假單胞菌的RNA自溶與ATP調(diào)節(jié)的現(xiàn)象??莶輻U菌菌體內(nèi)的RNase為ATP及ADP所抑制的現(xiàn)象,大腸桿菌菌體內(nèi)RNaseII受ATP抑制的現(xiàn)象等都不支持Erlich的推論。

鹽濃度、PH

許多細(xì)菌若在踐行緩沖液中保溫,就會(huì)導(dǎo)致RNA自溶,自溶與否,取決于鹽濃度的高低,如中性鹽能促進(jìn)馬鈴薯疫酶RNA的自溶,鹽對(duì)RNA自溶的促進(jìn)作用,是由于鹽能增大底物對(duì)rRNA分解酶的敏感性。核糖體吸附RNase的能力,會(huì)隨著鹽濃度的增加而減少,與此同時(shí),缺激活了核糖體RNase這些事實(shí)暗示核糖體能放生魚鹽濃度有依賴性關(guān)系的變性。

在各種酵母中也會(huì)發(fā)生依賴于PH的RNA自溶現(xiàn)象,一般酵母自溶在酸性條件下,生成3-核苷酸;在堿性條件下生成5-核苷酸

其他因素

通過冷凍干燥、攪拌及其他各種伊蘇也會(huì)引起RNA的自溶。除分泌吸收紫外的物質(zhì)外,在不特加以刺激的培養(yǎng)中,生成核苷酸類物質(zhì)。其生成機(jī)制,認(rèn)為是基于RNA自溶的例子頗多。


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