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EB注意事項(xiàng)

閱讀:3043        發(fā)布時(shí)間:2018/6/25
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分子式:C21H20BrN3分子結(jié)構(gòu)
  英文名:Ethidium bromide
  分子量: 394.3139 g/mol
  熔點(diǎn):260 - 262 °C
  為芳香族熒光化合物
  EB(Ethidium bromide,溴化乙錠)
  溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑,用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。溴化乙錠用標(biāo)準(zhǔn)302nm 紫外光透射儀激發(fā)并放射出橙紅色信號,可用Polaroid 底片或帶CCD 成像頭的凝膠成像處理系統(tǒng)拍攝。
  溴化乙錠可以嵌入堿基分子中,導(dǎo)致錯(cuò)配。溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑,具有高致癌性! 普通實(shí)驗(yàn)手套(淺黃色乳膠手套)不能很好的阻擋EB,需要用藍(lán)色實(shí)驗(yàn)用手套。
  觀察瓊脂糖凝膠中DNA常用的方法是利用熒光染料溴化乙錠進(jìn)行染色,溴化乙錠含有一個(gè)可以嵌入DNA堆積堿基之間的一個(gè)三環(huán)平面基團(tuán)。它與DNA的結(jié)合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強(qiáng)度的飽和溶液中,大約每2.5個(gè)堿基插入一個(gè)溴化乙錠分子。當(dāng)染料分子插入后,其平面基團(tuán)與螺旋的軸線垂直并通過范德華力與上下堿基相互作用。這個(gè)基團(tuán)的固定位置及其與堿基的密切接近,導(dǎo)致與DNA結(jié)合的染料呈現(xiàn)熒光,其熒光產(chǎn)率比游離溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm處的紫外輻射并傳遞給染料,而被結(jié)合的染料本身吸收302nm和366nm的光輻射。這兩種情況下,被吸收的能量在可見光譜紅橙區(qū)的590nm處重新發(fā)射出來。由于溴化乙錠-DNA復(fù)合物的熒光產(chǎn)率比沒有結(jié)合DNA的染料高出20-30倍,所以當(dāng)凝膠中含有游離的溴化乙錠(0.5ug/ml)時(shí),可以檢測到少至10ng的DNA條帶。
  溴化乙錠可以用來檢測單鏈或雙鏈核酸(DNA或RNA)。但是染料對單鏈核酸的親和力相對較小,所以其熒光產(chǎn)率也相對較低。事實(shí)上,大多數(shù)對單鏈DNA或RNA染色的熒光時(shí)通過染料結(jié)合到分子內(nèi)形成較短的鏈內(nèi)螺旋產(chǎn)生的。
  由于在該染料存在的情況下,線狀DNA的電泳遷移率約降低15%,因此,當(dāng)需要知道DNA  pian段的準(zhǔn)確大?。ㄈ鏒NA限制酶酶切圖譜的鑒定)時(shí),凝膠應(yīng)該在無EB情況下電泳,電泳結(jié)束后用EB染色。染色完畢后,通常不需要脫色。但是在檢測小量DNA(小于10ng)片段時(shí),通常要將染色后的凝膠進(jìn)行脫色。
溴化乙錠的損害
  溴化乙錠可以嵌入堿基分子中,導(dǎo)致錯(cuò)配。溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑,具有高致癌性!
  SYBR Green I 和溴化乙啶(EB)Ames 測試結(jié)果顯示EB容易引起有機(jī)體突變。(Singer et al., Mutat. Res. 199, 439: 37- 47.)
溴化乙錠溶液的凈化處理
  由于溴化乙錠具有一定的毒性,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,應(yīng)對含EB的溶液進(jìn)行凈化處理再行棄置,以避免污染環(huán)境和危害人體健康。
  (1) 對于EB含量大于0.5mg/ml的溶液,可如下處理:
 ?、賹B溶液用水稀釋至濃度低于0.5mg/ml;
 ?、诩尤胍槐扼w積的0.5mol/L KMnO4,混勻,再加入等量的25mol/L HCl,混勻,置室溫?cái)?shù)小時(shí);
 ?、奂尤胍槐扼w積的2.5mol/L NaOH,混勻并廢棄。
  (2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下處理:
 ?、?按1mg/ml的量加入活性炭,不時(shí)輕搖混勻,室溫放置1小時(shí);
 ?、?用濾紙過濾并將活性碳與濾紙密封后丟棄。
 

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