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流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)處理與分析
數(shù)據(jù)的顯示通常可分為一維單參數(shù)直方圖（histogramplot）、二維點圖（dotplot）、二維等高圖（contour）和假三維圖（pseudo3D）等。下面簡述zui常用的單參數(shù)直方圖和二維點圖。
1. 單參數(shù)直方圖單參數(shù)直方圖是一維數(shù)據(jù)用得zui多的圖形，可用來進(jìn)行定性分析和定量分析。橫坐標(biāo)表示熒光信號或散射光信號強(qiáng)度的相對值，其單位用“道數(shù)”（channel）表示，橫坐標(biāo)可以是線性的，也可以是對數(shù)的。縱坐標(biāo)通常代表細(xì)胞出現(xiàn)的頻率或相對細(xì)胞數(shù)。下面以研究細(xì)胞周期為例說明如何分析單參數(shù)直方圖所表達(dá)的信息。
單參數(shù)直方圖
經(jīng)DNA特異性染料（如P1）染色的細(xì)胞群體，通過流式細(xì)胞儀測量區(qū)受激光照射后發(fā)出特異性熒光，在一定條件下，熒光強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)的DNA含量成正比，DNA含量高的細(xì)胞發(fā)射的熒光強(qiáng)，反之則弱。
DNA含量與細(xì)胞數(shù)目的關(guān)系，即2N（2倍體）代表GO/G1期細(xì)胞，4N（4倍體）代表G2/M期細(xì)胞，兩者中間代表S期細(xì)胞。這是典型的以2倍體和4倍體細(xì)胞為主的流式DNA圖。通過上述信息可得到所測細(xì)胞群
中增殖細(xì)胞的數(shù)量。
2. 二維點圖單參數(shù)直方圖只能表明一個參數(shù)與細(xì)胞數(shù)量間的關(guān)系，不能顯示兩個獨(dú)立參數(shù)與細(xì)胞數(shù)量的關(guān)系。當(dāng)需要研究兩個或更多測量參數(shù)之間的關(guān)系時，可采用二維點圖。
二維點圖有兩種形式，橫坐標(biāo)表示前向散射光（FSC），反映細(xì)胞的大?。豢v坐標(biāo)表示側(cè)向散射光，反映細(xì)胞內(nèi)顆粒的大小和多少。坐標(biāo)圖上每一點同時表示具有相應(yīng)坐標(biāo)值的細(xì)抱存在。
例如，人血白細(xì)胞懸液樣品上機(jī)后，在坐標(biāo)圖上根據(jù)細(xì)胞大小和細(xì)胞內(nèi)顆粒形態(tài)出現(xiàn)三類不同顏色的細(xì)胞群，通過設(shè)門框把這三類細(xì)胞區(qū)分開，即紅色顯示（P1）淋巴細(xì)胞群，綠色顯示（P2）單核細(xì)胞群，藍(lán)色顯示（P3）中性粒細(xì)胞群。如果欲檢測其中一種細(xì)胞兩個獨(dú)立參數(shù)與細(xì)胞數(shù)量之間的關(guān)系，則選定其中一個門框。
假設(shè)選定淋巴細(xì)胞（P1），即可對其兩種不同熒光素標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行分析，出現(xiàn)第二種形式的二維點圖。橫坐標(biāo)為PerCP-Cy5熒光標(biāo)記的CD3細(xì)胞數(shù)目（熒光道數(shù)），縱坐標(biāo)為FITC熒光標(biāo)記的CD4細(xì)胞數(shù)目（熒光道數(shù)）。
因此，左上象限（Q1）代表CD4―細(xì)胞百分比，右上象限（Q2）代表CD4+/CD3-細(xì)胞百分比，左下象限（Q3）代表CD4―/CD3―細(xì)胞百分比，右下象限（Q4）代表CD3―細(xì)胞百分比。由此得知，在CD3+淋巴細(xì)胞中CD4―淋巴細(xì)胞所占的百分比。
雙指標(biāo)二維點囤的細(xì)胞群框定 熒光雙染色二維點圖