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上海乾思生物科技有限公司

核酸提取與純化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

時(shí)間:2015-7-1閱讀:121

關(guān)鍵詞:核酸提取與純化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌核酸提取與純化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
核酸提取與純化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒?yàn)流程:
1.核酸的提取
核酸都溶于水,而不溶于有機(jī)溶劑,利用此性質(zhì)進(jìn)行提取。在細(xì)胞內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成脫氧核糖核蛋白(DNP),RNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成核糖核蛋白(RNP),在不同濃度的鹽溶液中它們的溶解度差別很大,DNP在純水或1 mol/LNaCl溶液中溶解度較大,但在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度很低,相反,RNP易溶解。因此,用0.14mol/LNaCl溶液可簡單地初步分開DNP和RNP。
在分離核酸中zui困難的是將核酸與緊密結(jié)合的蛋白質(zhì)分開,而且還要避免核酸的降解。常用的解離劑是陰離子去垢劑,如脫氧膽酸鈉,十二烷基硫酸鈉(SDS),4-氨基水楊酸鈉和萘-1,5-二磺酸鈉等,它們具有溶解病毒、細(xì)菌的作用,可使核酸從蛋白質(zhì)上游離出來,還具有抑制核糖核酸酶的作用。另外除去核酸中的蛋白質(zhì)的一個(gè)有效辦法是用酚-氯仿混合液,它們可使蛋白質(zhì)變性,并對(duì)核糖核酸酶有抑制作用,另外氯仿比重大可使有機(jī)相和水相*分開,減少殘留在水相中的酚。在用酚-氯仿抽提核酸提取液時(shí),還須要?jiǎng)×艺駬u,為防止起泡和促使水相與有機(jī)相的分離,在酚-氯仿抽提液中再加上一定量的異戊醇。
2. 核酸的純化
核酸的純化zui關(guān)鍵步驟是去除蛋白質(zhì),通常只要用酚/氯仿、氯仿抽提核酸的水溶液即可。每當(dāng)需要把DNA克隆操作的某一步所用的酶滅活或去除以便進(jìn)行下一步時(shí),可進(jìn)行這種抽提。然而,如果從細(xì)胞裂解液等復(fù)雜的分子混合物中純化核酸,則要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白質(zhì)后,再用有機(jī)溶劑抽提。這些廣譜的蛋白酶包括鏈霉蛋白酶及蛋白酶K等,它們對(duì)多數(shù)天然蛋白質(zhì)均有活性。
用酚/氯仿抽提:這兩種有機(jī)溶劑合用,比單獨(dú)用酚抽提除蛋白效果更佳。繼而用氯仿抽提則可除去核酸制品中的痕量酚。具體步驟如下:
①核酸樣品置有蓋小離心管中,加入等體積的酚/氯仿;②旋渦混勻管內(nèi)容物,使呈乳狀;③12000g室溫離心15s;④水相移入另一離心管,棄去兩相界面和有機(jī)相;⑤重復(fù)步驟①~④,直至兩相界面上無蛋白質(zhì)為止;⑥加入等體積的氯仿并重復(fù)②~④步操作;⑦按下述核酸濃縮法沉淀回收核酸。
3.核酸的濃縮
應(yīng)用zui廣的核酸濃縮法是乙醇沉淀法。在中等濃度單價(jià)陽離子存在下,加入一定量的乙醇后,所形成的核酸沉淀可經(jīng)離心而回收。甚至對(duì)低至pg(皮克)量的DNA或RNA,也可定量回收?;厥盏暮怂峥砂此铦舛龋偃苡谶m當(dāng)?shù)木彌_液中。具體操作時(shí),可向含樣品的小離心管中加入單價(jià)陽離子鹽貯存液。單價(jià)陽離子鹽的選擇,主要基于下述考慮:用醋酸銨可減少dNTP的共沉淀,但在以后要作核酸的磷酸化時(shí)應(yīng)避免用醋酸銨,因銨離子是多核苷酸激酶的強(qiáng)烈抑制劑。當(dāng)用較高濃度的乙醇沉淀RNA時(shí),常用LiCl,因LiCl在乙醇中溶解度很高,不隨核酸共沉淀。含有SDS的核酸樣品,應(yīng)使用NaCl,這時(shí)該去垢劑在70%乙醇中仍保持可溶。
DNA和RNA的沉淀,大多使用醋酸鈉(pH5.2)。
產(chǎn)品組成:
集液管
核酸純化柱的集液管由醫(yī)療級(jí)的聚丙烯制成,容量為2ml和50ml。
Column
核酸純化柱的column由醫(yī)療級(jí)的聚丙烯制成,底部為網(wǎng)狀或帶接口,容量約為1ml或25ml。
墊片
核酸純化柱的墊片為特殊纖維材料,耐受酸堿和大部分的有機(jī)溶劑,對(duì)大部分的生物分子不會(huì)產(chǎn)生吸附。
濾膜
經(jīng)過特別優(yōu)化的進(jìn)口原料的硅膠膜或者玻璃纖維膜,zui大程度的吸附核酸分子。

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