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上海拜力生物科技有限公司

核酸提取與純化技術服務|實驗技術服務

時間:2015-7-1閱讀:496

關鍵詞:核酸提取與純化技術服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌核酸提取與純化技術服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
核酸提取與純化技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
1.核酸的提取
核酸都溶于水,而不溶于有機溶劑,利用此性質進行提取。在細胞內DNA與蛋白質結合成脫氧核糖核蛋白(DNP),RNA與蛋白質結合成核糖核蛋白(RNP),在不同濃度的鹽溶液中它們的溶解度差別很大,DNP在純水或1 mol/LNaCl溶液中溶解度較大,但在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度很低,相反,RNP易溶解。因此,用0.14mol/LNaCl溶液可簡單地初步分開DNP和RNP。
在分離核酸中zui困難的是將核酸與緊密結合的蛋白質分開,而且還要避免核酸的降解。常用的解離劑是陰離子去垢劑,如脫氧膽酸鈉,十二烷基硫酸鈉(SDS),4-氨基水楊酸鈉和萘-1,5-二磺酸鈉等,它們具有溶解病毒、細菌的作用,可使核酸從蛋白質上游離出來,還具有抑制核糖核酸酶的作用。另外除去核酸中的蛋白質的一個有效辦法是用酚-氯仿混合液,它們可使蛋白質變性,并對核糖核酸酶有抑制作用,另外氯仿比重大可使有機相和水相*分開,減少殘留在水相中的酚。在用酚-氯仿抽提核酸提取液時,還須要劇烈振搖,為防止起泡和促使水相與有機相的分離,在酚-氯仿抽提液中再加上一定量的異戊醇。
2. 核酸的純化
核酸的純化zui關鍵步驟是去除蛋白質,通常只要用酚/氯仿、氯仿抽提核酸的水溶液即可。每當需要把DNA克隆操作的某一步所用的酶滅活或去除以便進行下一步時,可進行這種抽提。然而,如果從細胞裂解液等復雜的分子混合物中純化核酸,則要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白質后,再用有機溶劑抽提。這些廣譜的蛋白酶包括鏈霉蛋白酶及蛋白酶K等,它們對多數天然蛋白質均有活性。
用酚/氯仿抽提:這兩種有機溶劑合用,比單獨用酚抽提除蛋白效果更佳。繼而用氯仿抽提則可除去核酸制品中的痕量酚。具體步驟如下:
①核酸樣品置有蓋小離心管中,加入等體積的酚/氯仿;②旋渦混勻管內容物,使呈乳狀;③12000g室溫離心15s;④水相移入另一離心管,棄去兩相界面和有機相;⑤重復步驟①~④,直至兩相界面上無蛋白質為止;⑥加入等體積的氯仿并重復②~④步操作;⑦按下述核酸濃縮法沉淀回收核酸。
3.核酸的濃縮
應用zui廣的核酸濃縮法是乙醇沉淀法。在中等濃度單價陽離子存在下,加入一定量的乙醇后,所形成的核酸沉淀可經離心而回收。甚至對低至pg(皮克)量的DNA或RNA,也可定量回收?;厥盏暮怂峥砂此铦舛?,再溶于適當的緩沖液中。具體操作時,可向含樣品的小離心管中加入單價陽離子鹽貯存液。單價陽離子鹽的選擇,主要基于下述考慮:用醋酸銨可減少dNTP的共沉淀,但在以后要作核酸的磷酸化時應避免用醋酸銨,因銨離子是多核苷酸激酶的強烈抑制劑。當用較高濃度的乙醇沉淀RNA時,常用LiCl,因LiCl在乙醇中溶解度很高,不隨核酸共沉淀。含有SDS的核酸樣品,應使用NaCl,這時該去垢劑在70%乙醇中仍保持可溶。
DNA和RNA的沉淀,大多使用醋酸鈉(pH5.2)。
產品組成:
集液管
核酸純化柱的集液管由醫(yī)療級的聚丙烯制成,容量為2ml和50ml。
Column
核酸純化柱的column由醫(yī)療級的聚丙烯制成,底部為網狀或帶接口,容量約為1ml或25ml。
墊片
核酸純化柱的墊片為特殊纖維材料,耐受酸堿和大部分的有機溶劑,對大部分的生物分子不會產生吸附。
濾膜
經過特別優(yōu)化的進口原料的硅膠膜或者玻璃纖維膜,zui大程度的吸附核酸分子。
服務說明
?細菌、細胞樣品需新鮮培養(yǎng);動物組織、植物組織等樣品取樣后需液氮或-80℃速凍;
?用于提取基因組DNA的血液樣品在4℃下可保存一周,-20℃下可保存1個月;
產品用途:
1. 適用于動物組織DNA/RNA提?。捍竽X、心臟、肺、胃、肝臟、胸腺、腎臟、腸、淋巴結、肌肉、骨骼等;
2.適用于植物組織DNA/RNA提?。喝~子、花、根、種子等;
3.適用于真菌、細菌等樣本DNA/RNA提??;
4.適用于法醫(yī)樣本DNA/RNA提?。簾燁^,糞便,口腔拭子,尿液,毛發(fā),血漬,精液等;
5.適用于體液DNA/RNA提?。貉濉⒀獫{、尿液、腦脊液、唾液、黏膜分泌液等;
6.適用于培養(yǎng)細胞DNA/RNA提取:HeLa、NIH/3T3、cos-7細胞等;
7.適用于全血、白細胞層等樣本DNA/RNA提?。?br>

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