關(guān)鍵詞:Western Blotting|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌Western Blotting|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*。
Western Blotting|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧，承諾客戶不成功不收費(fèi)。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí)，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn)。另一方面，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
對(duì)于Western Blotting實(shí)驗(yàn)而言，樣品處理是關(guān)鍵步驟之一，獲得的蛋白樣品必須均質(zhì)、可溶，并解離成單個(gè)多肽亞基，且盡量減少相互間的聚集，使其zui終僅依賴本身的分子量大小進(jìn)行分離。當(dāng)目標(biāo)蛋白的含量很低時(shí)，需要選取目標(biāo)蛋白含量較高的組織或細(xì)胞器（如核抽提物），或者通過免疫沉淀等方式進(jìn)行富集。通常樣品有重組蛋白、細(xì)胞和組織等。
1.樣品收集
1）培養(yǎng)的細(xì)胞
貼壁和懸浮細(xì)胞收集方式不同，細(xì)胞裂解液種類各異，推薦含SDS的凝膠加樣緩沖液裂解，煮沸即可。
2）動(dòng)物組織
與細(xì)胞不同，組織塊由于體積較大，須預(yù)先經(jīng)破碎勻漿處理。
2．樣品定量
樣品電泳前需測(cè)定蛋白濃度，以便保證上樣量一致，有利于后續(xù)定量或半定量分析。常用的蛋白質(zhì)濃度測(cè)定方法有好多種，其靈敏度和所需時(shí)間不同，且不同的方法會(huì)受不同干擾物質(zhì)的影響，實(shí)驗(yàn)者可根據(jù)樣品制備方法（裂解液成分、去垢劑和還原劑種類等）自行選擇。
注意事項(xiàng)：
a. 應(yīng)盡量避免引入影響后續(xù)定量的雜蛋白（如細(xì)胞培養(yǎng)液、蛋白酶抑制劑等）及其他干擾物質(zhì)；
b. 樣品濃度應(yīng)適中，1×SDS凝膠加樣緩沖液建議用量：貼壁細(xì)胞按10cm2培養(yǎng)皿/0.1ml，懸浮細(xì)胞按5×106細(xì)胞/0.1ml比例加入；
c. SDS對(duì)蛋白質(zhì)變性和電泳分離至關(guān)重要，濃度應(yīng)控制在2-10%之間，并根據(jù)具體需要調(diào)整；
d. 制備好的樣品可以在-20℃保存，但時(shí)間不宜過長(zhǎng)，并避免反復(fù)凍融，否則蛋白會(huì)發(fā)生降解；
e. 內(nèi)參對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要，應(yīng)選擇合適的內(nèi)參。
Western印跡含一系列步驟，包括：
?? 用聚丙烯酰胺凝膠分離蛋白樣品。
?? 將膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到膜上。
?? 鑒定膜上特定蛋白。
下面將從理論和實(shí)踐方面討論Western印跡方法。
用1-D或2-D凝膠分離復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物
印跡前分離復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物的zui常見方法是一維（1-D）SDS-PAGE電泳，它根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量進(jìn)行分離。有時(shí)用非變性電泳分離天然蛋白質(zhì)。盡管這種方法通常缺乏變性電泳的分辨率，但當(dāng)?shù)鞍醉毐Ａ羯锘钚詴r(shí)非常有用。
二維（2-D）凝膠電泳用于分析細(xì)胞、組織、和體液蛋白質(zhì)的組成，是現(xiàn)代蛋白質(zhì)組學(xué)的關(guān)鍵技術(shù)。2-D免疫印跡可提供分子量和等電點(diǎn)信息，并可用于區(qū)分翻譯后修飾產(chǎn)生的不同蛋白質(zhì)形式。有些情況下只進(jìn)行1-D電泳分離也可用免疫印跡對(duì)蛋白分型。