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上海拜力生物科技有限公司

Western Blot wb免疫印跡檢測課題服務(wù)

時間:2015-6-2閱讀:681

關(guān)鍵詞:Western Blot wb免疫印跡檢測課題服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌Western Blot wb免疫印跡檢測課題服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
Western Blot wb免疫印跡檢測課題服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗。另一方面,我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:|實驗技術(shù)服務(wù)   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),“探針"是抗體,“顯色"用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝 酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗 體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋 白水平的表達(dá)。
western blot的實驗步驟及注意事項的資料 
1. 把聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)電泳轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上。 
1)轉(zhuǎn)移緩沖液洗滌凝膠和硝酸纖維素膜,將硝酸纖維素膜鋪在凝膠上,用5ml移液管在凝膠上來回滾動去除所有的氣泡。 
2)在凝膠/濾膜外再包一張3mm濾紙(預(yù)先用轉(zhuǎn)移緩沖液浸濕),將凝膠夾在中間,保持濕潤和沒有氣泡。 
3)將此濾紙/凝膠/薄膜濾紙按照廠家建議方法放入電泳裝置中,凝膠面向陰極。 
4)將上述裝置放入緩沖液槽中,并灌滿轉(zhuǎn)移緩沖液以淹沒凝膠。 
5)按照廠家所示接通電源開始電泳轉(zhuǎn)移。 
6)轉(zhuǎn)移結(jié)束后,取出薄膜和凝膠,棄去凝膠。 
2. 將薄膜漂在氨基黑中快速染色,直至分子量標(biāo)準(zhǔn)顯現(xiàn)時取出,記錄下標(biāo)準(zhǔn)位置。 
3. 用100ml水洗滌纖維素膜,必要時可用脫色緩沖液。 
4. 膜置印跡緩沖液中于37℃保溫1小時。 
5. 室溫下,用PBS-Tween緩沖液洗滌薄膜。 
6. 用封口機(jī)將薄膜封入塑料袋中,盡可能不留空氣。 
7.袋的一角剪一緩沖液的小口,用透析袋夾緊。 
8.混合:NGS(100微升),印跡緩沖液中的抗體(10毫升),加在裝薄膜的袋中,于室溫下?lián)u動2小時(或4℃) 
9.用總體積300ml PBS-Tween緩沖液,分4次在一淺盤中洗滌薄膜,每次75ml。 
10. 將連接生物素的羊抗兔IgG(40微升溶于10毫升印跡緩沖液/100微升 NGS)加在袋內(nèi),于室溫下?lián)u動1小時。 
11. 按步驟9洗滌。 
12. 加入抗生素蛋白-HRP(40微升溶于10毫升印跡緩沖液/100微升 NGS),于室溫下?lián)u動。 
注意事項: 
western blot中轉(zhuǎn)移在膜上的蛋白處于變性狀態(tài),空間結(jié)構(gòu)改變,因此那些識別空間表位的抗體不能用于western blot檢測。這種情況可以將表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞或細(xì)胞裂解液中的所有蛋白物素化,再用酶標(biāo)記親和素進(jìn)行western blot。實驗中取膠和膜需帶手套。 

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