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上海拜力生物科技有限公司

Transwell實驗服務|實驗技術服務

時間:2015-6-2閱讀:791

關鍵詞:Transwell實驗服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌Transwell實驗服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
Transwell實驗服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,我們也會提供相應的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產(chǎn)品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
細胞種在上室內,因聚碳酸酯膜有通透性,故可研究下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響。
根據(jù)transwell的特點(孔徑,膜),可進行如下方面研究:
1.共培養(yǎng)                   孔徑<3.0um
研究下室細胞B代謝物(分泌物)對上室細胞A的影響。
2.細胞趨化               孔徑可選擇5.0、8.0、12.0μm
研究進入下室的細胞量,反映下室成分對上室細胞的趨化能力
3.細胞遷移               孔徑常選擇8.0、12.0μm
研究進入下室的細胞量,反應上室細胞的遷移能力
4.細胞侵襲               孔徑常選擇8.0、12.0μm,膜上室側鋪有基質膠,
研究進入下室的細胞量,反映上室細胞的侵襲能力
一、腫瘤細胞侵襲實驗(transwell)
原理:
模仿體內細胞外基質,細胞只有分泌基質金屬蛋白酶(MMPs),降解基質膠才可進入下室。
步驟
1.  Transwell小室準備
1)無基質膠Transwell小室制備
A. 包被基底膜:
A. Matrigel (50mg/L)按1:8稀釋,無血清培養(yǎng)基作為稀釋液
B. 取適量加入Transwell小室中(24孔板transwell小室加100 ul),4℃操作。
C. 37℃培養(yǎng)箱中,孵育4-5h(>5h);出現(xiàn)“白色層"時,說明已經(jīng)變?yōu)楣虘B(tài)。
2)有基質膠Transwell小室制備
A. 小室放入培養(yǎng)板中,上室加入300μl預溫的無血清培養(yǎng)基
B. 室溫下靜置15-30min,使基質膠再水化
C. 再吸去剩余培養(yǎng)液。
2.細胞懸液準備
1)消化、收集細胞;
2)PBS洗1-2次
3)用含BSA的無血清培養(yǎng)基重懸(細胞密度約在1-10×105/ml)。
3. 細胞接種
1)取適量細胞懸液加入Transwell小室(按transwell說明)。24孔板小室一般200μl。
2)24孔板下室一般加入500μl含F(xiàn)BS或趨化因子的培養(yǎng)基。注意避免氣泡產(chǎn)生(下層培養(yǎng)液和小室間)
3) 培養(yǎng)細胞:常規(guī)培養(yǎng)12-48h(主要依癌細胞侵襲能力而定)。
4. 結果統(tǒng)計

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