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上海拜力生物科技有限公司

MTT檢測技術服務|實驗技術服務

時間:2015-5-15閱讀:381

關鍵詞:MTT檢測技術服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌MTT檢測技術服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
MTT檢測技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時,我們也會提供相應的原始數據和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
MTT為黃色化合物,是一種接受氫離子的染料,在活細胞中作用于線粒體的呼吸鏈,MTT在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下生成藍色的formazan結晶,formazan結晶的生成量與活細胞數目成正比,生成的formazan結晶可溶解在DMSO中,利用酶標儀測定570 nm處的光密度OD值,可以反映出活細胞數目和細胞活力。死細胞中由于沒有琥珀酸脫氫酶,因此不能還原MTT生成formazan結晶。
優(yōu)點:經濟、靈敏度高,可用于大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。
缺點:由于MTT經還原所產生的formazan結晶產物不溶于水,需有機溶劑溶解后才能檢測,這不僅使工作量增加,也會對實驗結果的準確性產生影響,而且有機溶劑對實驗人員也有損害。
①將對數生長期的細胞濃度調整為1~10×104細胞/ml,按103~104個細胞接種于96孔板,每孔100 μl;
②培養(yǎng)細胞24小時后,對其進行不同處理,每個處理設三個平行對照;
③(MTT法)適當培養(yǎng)時間后,取出細胞,倒掉培養(yǎng)液,每孔加入5 mg/ml新鮮配制的MTT溶液,溫育4小時,再次倒掉上清液,每孔加入200 ml DMSO,搖勻后,酶標儀檢測吸光值。
③(臺盼藍拒染法)適當培養(yǎng)時間后,收集細胞,經臺盼藍染色,在倒置顯微鏡下計數藍染及不染色細胞,計算細胞存活率。
操作步驟:
1、無菌條件下取新生一天的SD大鼠DRG。
2、鏡下去除神經根和外膜,接種于預先涂有L-多聚賴氨酸的96孔培養(yǎng)板中,每孔1個DRG。
3、待DRG貼壁后加入100μl無血清L15基礎培養(yǎng)基,實驗組加入純化的表達蛋白(分別以不同的蛋白濃度),陰性對照加入等體積的溶解表達蛋白的溶劑。
4、37℃ 5%CO2培養(yǎng),每天在Olympus倒置顯微鏡下觀察細胞的生長情況,并進行測量,其數據作統(tǒng)計分析。
注意事項
1、選擇適當得細胞接種濃度。
2、避免血清干擾:一般選小于10%的胎牛血清的培養(yǎng)液進行試驗。在呈色后盡量吸盡孔內殘余培養(yǎng)液。
3、設空白對照:與試驗平行不加細胞只加培養(yǎng)液的空白對照。其他試驗步驟保持一致,zui后比色以空白調零。
MTT實驗吸光度zui后要在0-0.7之間,超出這個范圍就不是直線關系,IC50是半抑制率,意思是抑制率50%的時候藥物的濃度。把藥品稀釋成不同的濃度,然后計算各自的抑制率,以藥品的濃度為橫坐標,抑制率為縱坐標作圖,然后得到50%抑制率時候的藥品濃度,就是IC50。要點:藥品2倍稀釋,多做梯度.

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