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上海拜力生物科技有限公司

MTT檢測|實驗技術(shù)服務(wù)

時間:2015-5-15閱讀:438

關(guān)鍵詞:MTT檢測|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌MTT檢測|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
MTT檢測|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗。另一方面,我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>MTT分析法以活細(xì)胞代謝物還原劑3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑藍(lán)為基礎(chǔ)。MTT為黃色化合物,是一種接受氫離子的染料,可作用于活細(xì)胞線粒體中的呼吸鏈,在琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素C的作用下tetrazolium環(huán)開裂,生成藍(lán)色的formazan結(jié)晶,formazan結(jié)晶的生成量僅與活細(xì)胞數(shù)目成正比(死細(xì)胞中琥珀酸脫氫酶消失,不能將MTT還原)。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶標(biāo)儀測定490 nm處的光密度OD值,以反映出活細(xì)胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。
1、接種細(xì)胞
用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細(xì)胞懸液,以每孔1000-10000個細(xì)胞接種到96孔板,每孔體積200ul。
2、培養(yǎng)細(xì)胞
同一般培養(yǎng)條件,培養(yǎng)3-5天(可根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時間)。
3、呈色
培養(yǎng)3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul.繼續(xù)孵育4小時,終止培養(yǎng),小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液,對于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO,振蕩10分鐘,使結(jié)晶物充分融解。
4、比色
選擇490nm波長,在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值,記錄結(jié)果,以時間為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長曲線。
二、注意事項
1、選擇適當(dāng)?shù)眉?xì)胞接種濃度。
2、避免血清干擾:一般選小于10%的胎牛血清的培養(yǎng)液進(jìn)行試驗。在呈色后盡量吸盡孔內(nèi)殘余培養(yǎng)液。
3、設(shè)空白對照:與試驗平行不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液的空白對照。其他試驗步驟保持一致,zui后比色以空白調(diào)零。
MTT實驗吸光度zui后要在0-0.7之間,超出這個范圍就不是直線關(guān)系,
IC50是半抑制率,意思是抑制率50%的時候藥物的濃度。把藥品稀釋成不同的濃度,然后計算各自的抑制率,以藥品的濃度為橫坐標(biāo),抑制率為縱坐標(biāo)作圖,然后得到50%抑制率時候的藥品濃度,就是IC50。要點:藥品2倍稀釋,多做梯度,做點線圖即可!

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