導語：細胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。直接從體內獲取的組織細胞進行培養(yǎng)為原代培養(yǎng)；當原代培養(yǎng)的細胞增殖達到一定密度后，則需要做再培養(yǎng)

一、實驗原理

細胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。直接從體內獲取的組織細胞進行培養(yǎng)為原代培養(yǎng)；當原代培養(yǎng)的細胞增殖達到一定密度后，則需要做再培養(yǎng)， 即將培養(yǎng)的細胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉移到另一個或幾個容器中擴大培養(yǎng)，為傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)的累積次數(shù)就是細胞的代數(shù)。

細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以zui大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或DMSO作保護劑，這兩種物質能提高 細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方 法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。

二、實驗方法

材料：

小鼠，生理鹽水，100ml滅菌燒杯，15ml離心管，培養(yǎng)皿，滴管，無菌鑷子、剪刀，篩網(wǎng)，泡沫板，大頭針，酒精燈，培養(yǎng)瓶，培養(yǎng) 液，PBS，0.25%胰酶，超凈工作臺、二氧化碳培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡，顯微鏡，計數(shù)板，離心機，恒溫水浴箱，冰箱（4℃、-20℃、-70℃），液氮 罐，凍存管，凍存液，廢液缸等。

請下載資料