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全自動(dòng)組織研磨機(jī)研磨破碎酵母細(xì)胞實(shí)驗(yàn)-上海凈信

閱讀:2066          發(fā)布時(shí)間:2017-9-8

多年的生化、遺傳學(xué)及分子分析研究所得的大量研究結(jié)果,使酵母成為生物制藥研究者的模式生物系統(tǒng)和工具。因此,酵母成為普遍的基因表達(dá)研究和重組蛋白的常見載體。盡管研究用的酵母種屬有多種,包括畢赤酵母屬、漢遜酵母屬和德巴利氏酵母屬,但常用的還是酵母菌屬。

使用傳統(tǒng)的酶分解法通常很難從細(xì)胞中提取完整的酵母mRNA和細(xì)胞內(nèi)蛋白。裂解酶通常是粗制備,包含的RNA酶和蛋白酶不僅會(huì)破壞細(xì)胞壁,還會(huì)破壞目標(biāo)分子。而且,酶裂解出原生質(zhì)體通常需要加入去垢劑,而去垢劑會(huì)造成多種蛋白質(zhì)失活。因此,機(jī)械裂解或破壞酵母細(xì)胞通常需要釋放一些小分子。


1、破碎前的準(zhǔn)備:

0.1g菌體(本實(shí)驗(yàn)以0.1g菌體為例);直徑10號(hào)鋼珠;研磨機(jī)(選用品牌上海凈信科技Tissulyser-24);50ML研磨罐。


2、研磨。 

0.1g菌體加入30ML PBS溶液,混勻后用移液器均勻滴入液氮中,收集液氮凍住的小球,將小球放入上海凈信科技50ML預(yù)冷過的研磨罐中,調(diào)整頻率為65Hz,震蕩時(shí)間20S。取下研磨罐再次放入液氮預(yù)冷15-20S取出來再次上機(jī)研磨。重復(fù)3次。



        

                                                                      研磨現(xiàn)場(chǎng)圖

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