久久久久亚洲精品男人的天堂,日本韩国男男作爱GAYWWW,特黄AAAAAAA片免费视频,av天堂电影网

產(chǎn)品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊

當(dāng)前位置:
衢州新芝生物科技有限公司>技術(shù)文章>高通量組織研磨儀對真菌細(xì)胞的破壁及DNA提取

技術(shù)文章

高通量組織研磨儀對真菌細(xì)胞的破壁及DNA提取

閱讀:2623          發(fā)布時間:2017-1-19

實驗?zāi)康?/strong>
       對真菌細(xì)胞進行破壁,提取其DNA。
 
實驗原理
       隨著分子生物學(xué)技術(shù)的進展,PCR相關(guān)方法越來越多地被應(yīng)用到真菌學(xué)研究中來,而真菌DNA的提取是包括分子診斷在內(nèi)的所有實驗的基礎(chǔ),簡便快捷地提取真菌DNA,且獲得的DNA完整、純度高,對真菌分子生物學(xué)的研究有及其重要的意義。
       真菌細(xì)胞壁以幾丁質(zhì)、葡萄糖為主構(gòu)成細(xì)胞壁骨架,而基質(zhì)則由多糖、甘露聚糖、糖蛋白、脂質(zhì)等填充。絲狀真菌堅韌厚壁的構(gòu)成,需要較為繁瑣的破壁手段,故真菌DNA的提取較細(xì)菌或其他組織細(xì)胞難度更大。為保證真菌PCR技術(shù)及其相關(guān)分子生物學(xué)技術(shù)的順利開展,簡便快捷地提取真菌DNA,且獲得的DNA完整、純度高,是必須解決的前提條件。
 
實驗材料和器具
樣品:真菌類
儀器:高通量組織研磨儀(上海凈信,Tissuelyser-48)
耗材:離心管(上海凈信,0.4研磨單位),研磨珠(上海凈信,6號,1顆)
試劑:TE Buffer,DA Buffer,E Binding Buffer,Elution Buffer
 
實驗步驟
方法1
1.1 取0.1g菌絲加入0.4研磨單位離心管中,加0.08mlTE Buffer,加入石英砂100mg;
1.2 將離心管放入上海凈信科技的高通量組織研磨儀Tissuelyser-48中,設(shè)置頻率13單位振頻,研磨10min;
1.3 取出離心管于65°C環(huán)境中溫浴30min,然后移出;
1.4 加入0.65mlDA Buffer,混合均勻后于冰浴中放置5min;
1.5 放入離心機14000r/min離心3min;
1.6 將上清液轉(zhuǎn)移到一個新的0.5研磨單位離心管中,加0.15ml的E Binding Buffer,并混合均勻,將混合液體轉(zhuǎn)移至Spin column;
1.7 放入離心機6000r/min離心1min,棄去接液管中液體;
1.8 Spin column中加入0.12ml的Wash Buffer,于10000r/min離心30s,棄去接液管中液體;
1.9 重復(fù)步驟1.8,棄去接液管中液體后,再10000r/min離心60s,Spin column轉(zhuǎn)到新的EP管中;
1.10 Spin column中加入0.03ml Elution Buffer,室溫放置1min。12000 r/min離心60s,并棄去Spin column。
 
方法2
2.1 取0.1g菌絲加入0.4研磨單位離心管中,加0.08ml10×TE Buffer,加入石英砂100mg;
2.2 將離心管放入上海凈信科技的高通量組織研磨儀Tissuelyser-48中,設(shè)置頻率60hz,研磨2-3min;
2.3 加入0.024ml10%SDS,加入0.002ml蛋白酶K,混勻,65°C環(huán)境中水浴30min;
2.4 然后渦旋1min,加入0.024ml5M NaCl,加入1/10體積的10%CTAB(約0.013ml);2.5 于65°C水浴60min,渦旋1min;
2.6 抽提,加入1/2體積(約0.07mi)的Tris飽和酚及1/2體積(約0.07ml)的lvfang:異戊醇(24:1),混勻;
2.7 于離心機14000轉(zhuǎn)離心1min,取上清液到另一離心管中;
2.8 重復(fù)步驟2.7 2-3次(視兩相界面雜質(zhì)多少而定)。
2.9 加入等體積lvfang:異戊醇(24:1)混勻,14000轉(zhuǎn)離心10min,取上清液至另一離心管中;
2.10 zui后開始沉淀,加入0.045ml NH4Ac,輕柔混勻,冰水中放置30min,加入0.6倍體積的異丙醇,混勻,14000轉(zhuǎn)離心10min,棄上清液;
2.11 用1000ul70%乙醇清洗沉淀,室溫晾干,加0.04ml TE Buffer溶解沉淀。

收藏該商鋪

登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
国产日韩欧美在线观看不卡| 中文字幕精品一区久久久久| 亚洲国产AV天码精品果冻传媒| 国产精品狼色在线观看视色| 亚洲人午夜射精精品日韩| JIZZ国产精品| 欧美日韩中文字幕在线观看| 88久久精品无码一区二区毛片| 国产一区二区丝袜在线播放| 日韩中文高清在线| 亚洲精品沙发午睡系列| 国产在线精品无码不卡手机免费| 久久精品伊人波多野结| 免费视频在线观看网站| 欧美日韩亚洲综合久久久| 久久久久亚洲AV成人片一区| 日韩电影免费在线观看网址| 亚洲一区二区三区在线| CHINESE熟女熟妇1乱| 日韩精品中文字幕少妇| 国模精品一区二区三区| CHINESE熟女熟妇1乱| 双腿靠墙两边打开调教视频| 日韩精品区一区二区三vr| 色噜噜狠狠一区二区三区| 亚洲综合一区二区| 久久精品国产亚洲7777| 国产在线国偷精品免费看| 一个人看的WWW片免费高清视频| 中文字幕aⅴ人妻一区二区| 东京热男人aV天堂| 国产一区二区三区乱码网站| 国产精品一区二区久久精品| 欧美大屁股XXXX高潮喷水| 亚洲AV日韩AV高清在线播放| 日本免费一区二区在线观看| 国产YW8825免费观看网站| а√天堂官网在线| 久久久久久久亚洲AV无码| 中文人妻乱交一二三区| 国产各种盗摄视频|