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人淋巴細(xì)胞分離液
閱讀：2062發(fā)布時(shí)間：2016-2-19
人淋巴細(xì)胞分離液 人淋巴細(xì)胞來(lái)源于人外周血，可根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康目蛇x擇密度梯度離心法、吸附分離法或其它特殊分離方法。Böyum在密度梯度離心法的基礎(chǔ)上提出通過(guò)使用Ficoll®甲泛影鈉溶液離心快速分離的方法，操作更方便、更快速。稀釋的血液在Ficoll®甲泛影鈉溶液中通過(guò)短時(shí)間的低速離心即可分層，紅細(xì)胞和粒細(xì)胞沉降至管底、淋巴細(xì)胞和血小板在中間形成2個(gè)分層。
人淋巴細(xì)胞分離液使用說(shuō)明：
1.輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合
2.無(wú)菌轉(zhuǎn)移3mlLSM到15ml離心管中。
3.混合2ml除纖維蛋白血液或肝素處理血液和2ml生理鹽水
4.仔細(xì)的將稀釋血液加入3mlLSM（室溫）于15ml離心管中，在血液和LSM中形成一個(gè)明顯的分層。不要將稀釋血液混合入LSM中。
5.室溫下400g離心15-30分鐘，離心可以沉淀紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞同時(shí)可以在LSM上形成一層單核淋巴細(xì)胞。
6.吸出淋巴細(xì)胞上方2-3mm的血漿。
7.吸取淋巴細(xì)胞層以及它下面一半的LSM和轉(zhuǎn)移到另外的一個(gè)離心管。加入等體積的平衡鹽緩沖液至淋巴細(xì)胞離心管中，室溫離心10分鐘，離心速度設(shè)定在既不損傷細(xì)胞又能沉淀細(xì)胞即刻，例如160–260xg（去除LSM和降低血小板的百分比）。
8.用平衡鹽緩沖液清洗細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基重懸細(xì)胞。
人淋巴細(xì)胞分離液使用說(shuō)明：
1.輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合
2.無(wú)菌轉(zhuǎn)移3mlLSM到15ml離心管中。
3.混合2ml除纖維蛋白血液或肝素處理血液和2ml生理鹽水
4.仔細(xì)的將稀釋血液加入3mlLSM（室溫）于15ml離心管中，在血液和LSM中形成一個(gè)明顯的分層。不要將稀釋血液混合入LSM中。
5.室溫下400g離心15-30分鐘，離心可以沉淀紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞同時(shí)可以在LSM上形成一層單核淋巴細(xì)胞。
6.吸出淋巴細(xì)胞上方2-3mm的血漿。
7.吸取淋巴細(xì)胞層以及它下面一半的LSM和轉(zhuǎn)移到另外的一個(gè)離心管。加入等體積的平衡鹽緩沖液至淋巴細(xì)胞離心管中，室溫離心10分鐘，離心速度設(shè)定在既不損傷細(xì)胞又能沉淀細(xì)胞即刻，例如160–260xg（去除LSM和降低血小板的百分比）。
8.用平衡鹽緩沖液清洗細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基重懸細(xì)胞。
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