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轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度—細胞無血清培養(yǎng)

閱讀:2549發(fā)布時間:2017-12-19

無血清培養(yǎng)基中應(yīng)該添加鐵飽和(Holo)的轉(zhuǎn)鐵蛋白,還是脫鐵(Apo)的轉(zhuǎn)鐵蛋白?

我們知道,一個轉(zhuǎn)鐵蛋白可以高親合力結(jié)合 2 個 Fe3+。結(jié)合了 2 個 Fe3+的轉(zhuǎn)鐵蛋白,

因其鐵離子結(jié)合位點均已被占用,所以稱為鐵飽和轉(zhuǎn)鐵蛋白,英文為Holo-transferrin,holo

是全部、*的意思。而未結(jié)合 Fe3+的轉(zhuǎn)鐵蛋白則稱為脫鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白,英文為 Apo-transferrin,其中 Apo 是分離的意思。

重組的轉(zhuǎn)鐵蛋白zui初均為 Apo-transferrin,要得到 Holo-transferrin 則需在酸性環(huán)境下

與一定量的六水硫酸鐵銨作用,然后再將 pH 值調(diào)至堿性,再作用一段時間即可。體外細胞培養(yǎng)時,Apo-transferrin 與細胞表面轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的親合力很弱,但當(dāng)其結(jié)合細胞外環(huán)境中的 Fe3+形成 Holo-transferrin 后,與細胞表面轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的親合力顯著提高,進而介導(dǎo)了對鐵的轉(zhuǎn)運。

 

那么在配制無血清培養(yǎng)基時,是應(yīng)該添加 Holo-transferrin(飽和) 還是 Apo-transferrin(脫鐵) 呢?

無血清培養(yǎng)基中多數(shù)都添加 Holo-transferrin(飽和),因為 Holo-transferrin (飽和)除發(fā)揮轉(zhuǎn)鐵作用外,自身即可作為細胞的鐵源,無需在培養(yǎng)基中另加外源性鐵。但在某些本身含鐵量高的培養(yǎng)基(如 DMEM/F12)中,則可使用 Apo-transferrin 這種不含鐵的轉(zhuǎn)鐵蛋白。

另外需要注意,通常我們無法從理論上推斷出到底是 Holo-transferrin 好還是 Apotransferrin好,zui準確的方法是進行實驗測試。

有報道在神經(jīng)細胞無血清培養(yǎng)時,添加物 B27與Holo-transferrin 合用會比與transferrin 合用獲得更好的神經(jīng)元培養(yǎng)質(zhì)量[1]。而另一種添加物 N2,與 Apo-transferrin合用時則會提高某些神經(jīng)干細胞的增殖能力。

 

小結(jié):無血清培養(yǎng)基一般添加鐵飽和轉(zhuǎn)鐵蛋白作為細胞鐵源。

 

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轉(zhuǎn)鐵蛋白在無血清培養(yǎng)基中的作用之一

維持細胞內(nèi)的鐵平衡

 

轉(zhuǎn)鐵蛋白的這個功能也很重要。對于細胞而言,并不是鐵越多越好,而應(yīng)當(dāng)是在適當(dāng)?shù)臅r間獲得適量的鐵。如果細胞內(nèi)的鐵過多,也跟細胞外環(huán)境一樣,鐵會誘導(dǎo)產(chǎn)生破壞力*的羥基自由基。而如果細胞內(nèi)鐵過少,則不足以維持細胞的生長和增殖。

那么轉(zhuǎn)鐵蛋白是如何調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的鐵平衡的呢?這與細胞表面的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體有關(guān)。

細胞表面轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的數(shù)目不是固定不變的,而是隨著細胞對鐵的需求程度而上調(diào)或下調(diào),因而可自主影響細胞對鐵的攝取量。

一般而言,靜止未活化的細胞表面轉(zhuǎn)鐵蛋白受體相對較少,而活化增殖的細胞表面轉(zhuǎn)鐵蛋白受體數(shù)目顯著增加。如淋巴細胞在有絲分裂因子的刺激下會發(fā)生轉(zhuǎn)化,在 DNA 合成前數(shù)小時,轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的數(shù)目明顯上調(diào),鐵攝入也相應(yīng)增加。而到了有絲分裂期,淋巴細胞表面轉(zhuǎn)鐵蛋白受體數(shù)目又明顯減少,這時細胞對鐵的需求量也降低了。腫瘤細胞均為快速增殖的細胞,所以相對于正常細胞,腫瘤細胞表面存在著大量的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體,以滿足腫瘤細胞對鐵的大量需求[2]。

此外,在細胞培養(yǎng)中,轉(zhuǎn)鐵蛋白受體數(shù)目與培養(yǎng)環(huán)境中鐵的含量也密切相關(guān)。

培養(yǎng)環(huán)境中的含鐵介質(zhì)比較多,則細胞表面轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的數(shù)目會減少,從而避免細胞攝入過量的鐵[2]。

既然轉(zhuǎn)鐵蛋白的作用僅是向細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運鐵離子,然后通過鐵離子來發(fā)揮維持細胞生長和增殖的作用,于是有研究者試圖在無血清培養(yǎng)基中加入鐵離子螯合劑,以將鐵離子轉(zhuǎn)運到細胞內(nèi),從而供細胞的生長所需,這樣可以避免使用轉(zhuǎn)鐵蛋白,使配制出無蛋白成分的無血清培養(yǎng)基成為可能。鐵離子螯合劑雖然也取得了部分成功,但對于絕大多數(shù)細胞并不能很好地維持細胞的生長,原因是鐵離子螯合劑只有轉(zhuǎn)鐵作用,但無調(diào)節(jié)鐵平衡的能力,常會導(dǎo)致細胞內(nèi)的鐵含量過多,進而產(chǎn)生自由基并使細胞受到損傷[3,4]。

 

參考文獻

[1] Chen Y, Stevens B, et al. NS21: re-defined and modified supplement B27 for neuronal cultures. J Neurosci Methods. 2008;171(2):239-47.

[2] 肖芒等。轉(zhuǎn)鐵蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體。國外醫(yī)學(xué)輸血及血液學(xué)分冊,1987;10(4):203-6。

[3] Kovar, J and Franek F. Growth-stimulating effect of transferrin on a hybridoma cell line: relation to transferrin iron-transporting function. Exp Cell Res. 1989;182(2):358-69.

[4] Eto, N, Yamada K, et al., Development of a protein-free medium with ferric citrate substituting transferrin for the c*tion of mouse-mouse hybridomas. Agric Biol Chem. 1991;55(3):863-5.

 

資料來源:BioGems


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