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【色譜】拖尾因子、對稱因子、不對稱因子之間的區(qū)別與聯(lián)系?

閱讀:34156      發(fā)布時間:2019-4-23
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  理論上講,色譜峰應(yīng)符合高斯曲線分布,然而實際上任何色譜峰都對高斯曲線分布存在一定的偏離,亦即不對稱。峰拖尾可以用不對稱因子(As)或USP拖尾因子(Tf)來衡量,顯然不對稱因子的說法更準(zhǔn)確,因為色譜峰存在前延、對稱、拖尾三種形態(tài)。一般來說,制藥行業(yè)以USP拖尾因子作為評測標(biāo)準(zhǔn),而其他行業(yè)則多采用As來測定峰形。

  對于藥物分析,通常有明確的規(guī)定,Tf應(yīng)處于某一范圍之間,比如我國藥典規(guī)定某些藥物的拖尾因子應(yīng)處于0.95~1.05之間。其他行業(yè)尚無較為明確的規(guī)定。

  美國藥典

  拖尾因子是美國藥典規(guī)定用于評價峰形對稱性的一個參數(shù),其計算公式為Tf=(A+B)/2A。拖尾因子的計算公式中A和B的數(shù)值如圖所示,從色譜峰的頂點作一條直線與基線垂直,再于峰高5%處做一條與基線平行的直線,與垂線相交于O,與峰的兩邊分別相交于點a和b,以A表示oa的長度,以B表示ob的長度。

  不隊稱因子的概念與拖尾因子接近,兩者的區(qū)別主要是有兩個:1)計算公式不同As=B/A;2)用于計算的A和B的取值方位不同,不對稱因子是以峰高10%處來計算的。下圖可清楚說明他們之間的關(guān)系。

  圖為拖尾因子與不對稱因子的區(qū)別與聯(lián)系。

  拖尾因子:Tailing factor常用Tf表示,以峰高5%處計算;

  不對稱因子:Asymmetry factor常用As表示,以峰高10%處計算;

  對稱因子:Symmetry factor常用S表示,與不對稱因子As互為倒數(shù)關(guān)系

  拖尾因子與不對稱因子的對應(yīng)關(guān)系如下表

  中國藥典

  藥典2005附錄VD 液相色譜法(征求意見稿):

  從圖中,我們可以看到,W0.05h指5%峰高處的峰寬,以峰頂點做垂線到5%峰寬,分為兩份,其中前一份為d1,假如前半峰d1=后半峰,則拖尾因子為1.00.也就是前后半峰5%處寬度相等,說明峰對稱 。如果前半峰d1小于后半峰,則Tailing factor 大于1,則峰后拖尾,反之是前拖。

  顯然,藥典中并沒有提到不對稱因子的概念。那么,我們常說的“不對稱因子“又是指的什么呢?

  不對稱因子(asymmetry):我們可以定義一個不對稱因子As來定量地表示色譜峰的不對稱程度,將10%峰高處前半峰的寬度設(shè)為a, 同高度處后半峰的寬度設(shè)為b,將b與a的比值定義為不對稱因子As。當(dāng)As大于1時為拖尾峰(tailing peak),當(dāng)As小于1時前延峰(leading peak或fronting peak)。

  對稱因子在0.95~1.05范圍內(nèi)是比較好的,當(dāng)T大于1即為拖尾。

  如果排除溶劑因素和物質(zhì)吸附或鍵合相尾部效應(yīng)等因素,單純從色譜柱填充效果來看,如果色譜柱前面填的緊密,后面填的疏松,即便有效塔板數(shù)合格,那么峰顯示處后拖尾;如果色譜柱前面填得疏松,后面緊密,則峰顯示前拖。所以,中國藥典要求色譜柱拖尾因子要在【0.95,1.05】之間。

  有人也許會有疑問,還有對稱因子啊。因為在我國一般用拖尾因子即可,《中國藥典》上的對稱因子是在10%峰高處測得,實際上是人工畫出的結(jié)果(主觀因素大),并且認(rèn)為0.95~1.05的峰是對稱的;但歐洲藥典的標(biāo)準(zhǔn)是機(jī)器作的(色譜工作站計算),要的多,所以定義為“對稱峰”的范圍也寬的多。

  對稱因子及10%峰高處峰寬比較對稱性,只是不同國家定義不同要求不同而已,具體可以參考一些書籍。在色譜工作站,也有拖尾因子計算,我們選擇5%峰高處計算即可。

 

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