12月8日早間，“女子接觸霉變玉米后肺部長滿真菌"沖上熱搜第一。據(jù)人民網(wǎng)，一23歲女子前段時間回老家?guī)兔κ沼衩祝潞筮B續(xù)1個多月咳喘不止。經(jīng)醫(yī)生檢查，她的肺部長滿了黃曲霉菌，引發(fā)了真菌感染。該女子回憶，當(dāng)時她在無防護(hù)措施情況下收玉米，有些玉米可能淋雨霉壞。[1]
什么是黃曲霉毒素？
黃曲霉毒素是黃曲霉、寄生曲霉等產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物。當(dāng)糧食未能及時曬干及儲藏不當(dāng)時，往往容易被黃曲霉或寄生曲霉污染而產(chǎn)生此類毒素。在各類食品中，花生、花生油、玉米污染最嚴(yán)重。黃曲霉毒素是一種劇毒的致肝癌物質(zhì)，人攝入大劑量的黃曲霉毒素后可出現(xiàn)肝實質(zhì)細(xì)胞壞死、膽管上皮細(xì)胞增生、肝脂肪浸潤及肝出血等急性病變。
事實上，世界范圍內(nèi)有多次黃曲霉毒素急性中毒事件，非洲的霉木薯餅中毒，印度的霉玉米中毒，肯尼亞黃曲霉玉米污染事件……所以把食物中的黃曲霉毒素控制在安全值以內(nèi)，也是各國都在嚴(yán)格把關(guān)不敢松懈的事兒。[2]
怎么鑒別食物中是否黃曲霉毒素超標(biāo)？
首先是快速識別，黃曲霉毒素是很苦的，食用花生、核桃等食物時如果感覺很苦，馬上吐出來，并漱口。
此外，?？萍瘓F(tuán)建立了Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀測定玉米、大米和花生油中黃曲霉毒素B族和G族的分析方法，供廣大食品檢測客戶參考。試樣經(jīng)過70%甲醇水溶液提取，提取液經(jīng)離心、稀釋后用含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和柱自動凈化。用20mL水淋洗柱子將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去，以甲醇洗脫免疫親和柱。將洗脫液在50℃條件下氮吹干，用1mL初始流動相定容，經(jīng)高效液相色譜儀上機(jī)分析。
圖-1.4種黃曲霉毒素的結(jié)構(gòu)式
下文參考GB5009.22-2016《食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》中第三法，采用免疫親和柱凈化，高效液相色譜檢測，建立了復(fù)雜糧油樣品基質(zhì)中黃曲霉毒素高靈敏度的前處理和分析方法，得到四種常見糧油樣品中黃曲霉毒素的加標(biāo)回收率在83-100%之間，RSD值小于5%。
1.標(biāo)準(zhǔn)曲線配置
使用?？艫uto Prep 200全自動液體樣品處理工作站可實現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的全自動化配置，可將購買的混合標(biāo)液（1000ug/L）通過工作站的直接稀釋模式，配置成濃度為10ug/L的工作中間液，緊接著可通過程序設(shè)置，吸取該工作液，配置一條濃度分別為0.5ug/L，2.0ug/L，5.0ug/L，25ug/L和100ug/L的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
圖-2. Auto Prep 200 液體工作站配標(biāo)程序
2.樣品提取與前處理
花生油樣品前處理
準(zhǔn)確稱取5g花生油樣品于50mL離心管中，加入20mL甲醇-水溶液（7:3）（v/v），渦旋震蕩提取20min，以7000r/min的轉(zhuǎn)速離心5min，取4mL上清液于80mL玻璃上樣管中，加入23mL 0.1%吐溫-20的PBS緩沖液混勻，待用。
（此處以花生油樣品前處理為例，玉米粉、大米樣品操作步驟同上）
固相萃取凈化條件
表-1 固相萃取凈化條件
以2mL/min的速度精確上樣27 mL待測液，10mL水潤洗樣品瓶，10mL水淋洗免疫親和柱，氣推30mL吹干免疫親和柱，推速為80mL/min。最后用2mL甲醇以0.5mL/min的速度洗脫樣品，收集洗脫液用?？艫uto EVA-60全自動平行濃縮儀于50°C、2psi條件下氮吹干，用初始流動相定容至1mL，過濾膜上機(jī)分析。詳細(xì)步驟見圖-3。
圖-3. Fotector Plus 黃曲霉毒素免疫親和凈化方法
3.樣品測試
油樣加標(biāo)測試
取空白花生油樣5g，添加2ug/kg的黃曲霉毒素G2、B2、G1和B1的標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行上述步驟的前處理凈化，樣品回收率如下表-2所示：
表-2添加水平為2ug/kg花生油樣的回收率
大米樣品加標(biāo)測試
大米中添加水平為2ug/kg的黃曲霉毒素G2、B2、G1和B1的回收率結(jié)果：
表-3添加水平為2ug/kg大米的回收率結(jié)果
玉米樣品加標(biāo)測試
玉米中添加水平為2ug/kg的黃曲霉毒素G2、B2、G1和B1的回收率結(jié)果：
表-4添加水平為2ug/kg玉米的回收率結(jié)果
4.注意事項
由于黃曲霉毒素在紫外光照射下不穩(wěn)定，因此在實驗過程中應(yīng)該避免紫外光和太陽光的照射。
谷物中離心完成后，不可放置過長時間，否則谷物容易重新吸水，可能導(dǎo)致提取液的濃度過高，使樣品的回收率偏高，影響測試結(jié)果。
固相萃取進(jìn)行提取液凈化前，特別對于偏酸或偏堿性樣品，應(yīng)用PBS緩沖溶液（pH=7.4）進(jìn)行稀釋后上機(jī)，否則可能會導(dǎo)致回收率偏低。
5.總結(jié)
標(biāo)液配制
凈化
濃縮
點擊圖片，了解儀器詳情
本文采用Auto Prep 200全自動液體樣品處理工作站可實現(xiàn)混標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)曲線的配置，全程無需人為值守，讓實驗人員遠(yuǎn)離有毒有害特別是黃曲霉毒素這樣的劇毒化學(xué)物質(zhì)，保護(hù)身體健康。
Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀能同步凈化6個樣品，連續(xù)自動處理60個樣品，做樣通量高；同時可無人值守，減少工作量。此外還可避免工作人員因操作失誤導(dǎo)致的檢測偏差，以及將實驗人員更迭對檢測結(jié)果的影響最小化。
Auto EVA-60全自動平行濃縮儀處理通量高，60個樣品可同時進(jìn)行氮吹，實驗平行性好；采用氮吹針自動追隨液面的設(shè)計，無需手動調(diào)節(jié)氮吹針且耗氣量小，省時省力。
本解決方案快速高效，且無需人員值守，讓實驗人員遠(yuǎn)離黃曲霉毒素等有害化學(xué)物質(zhì)且提供工作效率。
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參考資料：
[1]《熱搜第一！女子接觸霉變玉米后肺部長滿黃曲霉菌，什么是黃曲霉毒素，它有哪些危害？》人民網(wǎng)人民數(shù)據(jù)
[2]《“食藥安全 科學(xué)生活"食品篇之黃曲霉毒素的前世今生》廣州市黃埔區(qū)人民政府
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