大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)elisa試劑盒基本信息簡介

血管緊張素轉(zhuǎn)換酶是一種膜結(jié)合糖蛋白分子，測定方法是放射性同位素法。

中文名 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶 特    性 是一種膜結(jié)合糖蛋白分子 測定方法 放射性同位素法 關(guān)    系 慢性阻塞性肺部疾病及肺心病。ACE 是一種膜結(jié)合糖蛋白分子量為150000 含鋅屬二肽羧肽酶能使血管緊張素I(十肽由腎素轉(zhuǎn)化而來，肽鏈C 末端的組氨酸和亮氨酸殘基水解形成具有增壓作用的血管緊張素II(八肽) 。后者通過與血管氣管平滑肌作用引起血管支氣管收縮ACE 也具有降血壓作用并參與緩激肽P 物質(zhì)等多肽性炎性物質(zhì)的滅活A(yù)CE 。還能直接作用于腎上腺皮質(zhì)促進(jìn)醛固酮分泌因此ACE 是腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)以及緩激肽系統(tǒng)的重要調(diào)節(jié)因素，影響人體多種生理機(jī)能ACE分布于全身各組織以肺副睪睪丸zui高。其次為十二指腸胰卵巢主動脈甲狀腺脾腎與肝的含量甚微此外巨噬細(xì)胞單核細(xì)胞人胎膜胎盤羊水和臍靜脈血也含此酶各組織ACE主要定位于毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞由于肺組織具有豐富的血管床且肺毛細(xì)血管床內(nèi)皮細(xì)胞所含的ACE 位于細(xì)胞外(外周血管床內(nèi)皮細(xì)胞所含的ACE 位于細(xì)胞內(nèi)) 促使血管緊張素I 轉(zhuǎn)化為血管緊張素II 的作用強(qiáng)且肺循環(huán)是體內(nèi)*不使血管緊張素II 滅活的血管床肺循環(huán)流出的血液中血管緊張素II 的含量zui高一般認(rèn)為血管內(nèi)皮細(xì)胞的ACE 與胞膜密切結(jié)合幾乎不釋放ACE 而巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生的ACE 大部分釋放入血故當(dāng)ACE 升高時(shí)應(yīng)考

慮為巨噬細(xì)胞 單核細(xì)胞系統(tǒng)的分泌亢進(jìn)多數(shù)報(bào)道血清ACE 活性無性別年齡吸煙體位時(shí)間變化清醒睡眠狀態(tài)不影響ACE 的活性早產(chǎn)兒足月兒新生兒及健康成人的血清ACE 活性無明顯差別但李平生等 Ucer G.報(bào)道ACE 活性男大于女Ucer G.(1)等報(bào)道血清ACE 活性與吸煙年齡性別有關(guān),與氧分壓呈負(fù)性相關(guān)。

大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)elisa試劑盒基本信息檢測方法簡介

實(shí)驗(yàn)開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。

為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。

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