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大鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1)elisa試劑盒怎么檢測

時間:2017-4-21閱讀:979
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大鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1)elisa試劑盒簡介

    ICAM-1(intercellular cell adhesion molecule-1 即細胞間黏附分子-1),又叫做CD54,屬于黏附分子中免疫球蛋白超家族(IGSF)中的成員,是介導(dǎo)黏附反應(yīng)重要的一個黏附分子。ICAM-1 在靜息的血管內(nèi)皮細胞(VEC)上呈低水平表達,通過與血管內(nèi)皮細胞表面上的特異性受體結(jié)合而發(fā)揮其生物學(xué)活性。作為白血球和內(nèi)皮細胞跨膜的蛋白質(zhì),ICAM1在穩(wěn)定細胞間相互作用和促進白血球和內(nèi)皮細胞的遷移起到重要作用。ICAM-1 的受體有LFA-1(lymphocyte function associated antigen-1, 即淋巴細胞功能相關(guān)抗原-1)和Mac-1,均屬于整合素家族。LFA-1是ICAM-1 的主要受體,而Mac-1與ICAM-1 的親和力較低,纖維蛋白原也可成為ICAM-1 的配體之一。

大鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1)elisa試劑盒怎么檢測

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次。

2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

3、加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

5、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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操作簡單、快速、靈敏度高、特異性強、性價比高、樣品所需量少

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