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區(qū)分差速離心法和速率區(qū)帶離心法

時間:2017-1-6閱讀:3529
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大多數(shù)科研客戶在取血清或者是上清的時候,都需要離心!那咱們就來著重討論一下差速離心法和速率區(qū)帶離心法,這兩種詳細(xì)方法的介紹!

   (一)差速離心法

  它利用不同的粒子在離心力場中沉降的差別,在同一離心條件下,沉降速度不同,通過不斷增加相對離心力,使一個非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分部沉淀。操作過程中一般是在離心后用傾倒的辦法把上清液與沉淀分開,然后將上清液加高轉(zhuǎn)速離心,分離出第二部分沉淀,如此往復(fù)加高轉(zhuǎn)速,逐級分離出所需要的物質(zhì)。

  差速離心的分辨率不高,沉淀系數(shù)在同一個數(shù)量級內(nèi)的各種粒子不容易分開,常用于其他分離手段之前的粗制品提取。

  (二)速率區(qū)帶離心法

  速率區(qū)帶離心法是在離心前于離心管內(nèi)先裝入密度梯度介質(zhì)(如蔗糖、甘油、KBr、CsCl等),待分離的樣品鋪在梯度液的頂部、離心管底部或梯度層中間,同梯度液一起離心。離心后在近旋轉(zhuǎn)軸處(X 1 )的介質(zhì)密度zui小,離旋轉(zhuǎn)軸zui遠(yuǎn)處(X 2 )介質(zhì)的密度zui大,但zui大介質(zhì)密度必須小于樣品中粒子的zui小密度,即ρ P >ρ m 。這種方法是根據(jù)分離的粒子在梯度液中沉降速度的不同,使具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內(nèi)分成一系列區(qū)帶,達(dá)到彼此分離的目的。梯度液在離心過程中以及離心完畢后,取樣時起著支持介質(zhì)和穩(wěn)定劑的作用,避免因機(jī)械振動而引起已分層的粒子再混合。

  由于ρ P >ρ m 可知S>0,因此該離心法的離心時間要嚴(yán)格控制,既有足夠的時間使各種粒子在介質(zhì)梯度中形成區(qū)帶,又要控制在任一粒子達(dá)到沉淀前。如果離心時間過長,所有的樣品可全部到達(dá)離心管底部;離心時間不足,樣品還沒有分離。由于此法是一種不*的沉降,沉降受物質(zhì)本身大小的影響較大,一般是應(yīng)用在物質(zhì)大小相異而密度相同的情況。常用的梯度液有Ficoll、Percoll及蔗糖。

 

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