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上海信帆生物科技有限公司
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化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

時(shí)間:2018-4-8閱讀:1462
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化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎大家!

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化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒

學(xué)發(fā)光法生物素檢測(cè)試劑盒(Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detection Kit)是一種通過Streptavidin-HRP及后續(xù)的BeyoECL Moon試劑來實(shí)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)Biotin標(biāo)記核酸的檢測(cè)試劑盒。適用于Southern blot、Northern blot、ribonuclease protection assay (RPA)或EMSA等實(shí)驗(yàn)中,采用生物素標(biāo)記的DNA或RNA探針時(shí)的檢測(cè)。本試劑盒不適用于生物素標(biāo)記蛋白的檢測(cè)。
      本試劑盒同時(shí)還提供了封閉液、洗滌液等檢測(cè)時(shí)所需的配套試劑。
      本試劑盒采用了高質(zhì)量的Streptavidin-HRP Conjugate,HRP和Streptavidin共價(jià)交聯(lián)的比例大于3,這樣比采用
Streptavidin和Biotin-HRP conjugate兩種試劑進(jìn)行檢測(cè)要更方便,并且靈敏度更高。
      采用了非特異性結(jié)合比avidin更低的strepatavidin,使檢測(cè)結(jié)果背景更低靈敏度更高。
      本試劑盒沒有提供生物素探針標(biāo)記相關(guān)的試劑,生物素標(biāo)記的DNA探針或EMSA探針的制備可以相應(yīng)地使用本公司提供的的生物素3'末端DNA標(biāo)記試劑盒或EMSA探針生物素標(biāo)記試劑盒。
      本試劑盒可以用于檢測(cè)至少10塊10 x 10cm有生物素標(biāo)記EMSA探針的膜,即共1000cm2。

化學(xué)發(fā)光法生物素標(biāo)記核酸檢測(cè)試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

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包裝清單:

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝

3308-1

BeyoECL Moon A液

55ml

3308-2

BeyoECL Moon B液

55ml

3308-3

Streptavidin-HRP Conjugate

100μl

3308-4

封閉液

380ml

3308-5

洗滌液(5X)

250ml

3308-6

檢測(cè)平衡液

250ml

說明書

1份

使用說明:

1. 在使用Biotin標(biāo)記探針的情況下,完成Southern、Northern雜交及后續(xù)洗滌后,或RPA的轉(zhuǎn)膜和交聯(lián)后,或EMSA的轉(zhuǎn)膜和交聯(lián)后,可以使用本試劑盒開始檢測(cè)。下面的檢測(cè)過程中溶液的用量是用于一片10x10cm膜的量。如果膜較大或較小,各溶液的用量可以按比例放大或縮小。

2. 37-50℃水浴溶解封閉液和洗滌液。

注意:封閉液和洗滌液必須*溶解后方可使用,封閉液和洗滌液可以在室溫至50℃之間使用,但必須確保這兩種溶液中均無沉淀產(chǎn)生,在冬天需特別注意。

3. 取一合適的容器加入15ml封閉液,再放入交聯(lián)過的含有樣品的尼龍膜。在側(cè)擺搖床或水平搖床上緩慢搖動(dòng)15分鐘。

4. 取7.5μl Streptavidin-HRP Conjugate加入到15ml封閉液中(1:2000稀釋),混勻備用。

5. 去除封閉液,加入上一步中配制的15ml含有Streptavidin-HRP Conjugate的封閉液。在側(cè)擺搖床或水平搖床上緩慢搖動(dòng)15分鐘。

6. 取25ml 洗滌液(5X),加入100ml重蒸水或Milli-Q級(jí)純水,混勻配制成125ml洗滌液。

7. 將尼龍膜轉(zhuǎn)移至另一裝有15-20ml洗滌液的容器內(nèi),漂洗1分鐘。

8. 去除洗滌液,加入15-20ml洗滌液,在側(cè)擺搖床或水平搖床緩慢上洗滌5分鐘。

9. 重復(fù)步驟8三次(共洗滌四次),每次洗滌時(shí)間均約為5分鐘。

10. 將尼龍膜轉(zhuǎn)移至另一裝有20-25ml檢測(cè)平衡液的容器內(nèi),在側(cè)擺搖床或水平搖床上緩慢搖動(dòng)5分鐘。

11. 取5ml BeyoECL Moon A液和5ml BeyoECL Moon B液混勻,配制成BeyoECL Moon工作液。注意:BeyoECL Moon工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。說明:從本步驟起操作方法和注意事項(xiàng)同Western實(shí)驗(yàn)的熒光檢測(cè)。

12. 取出尼龍膜,用吸水紙吸去過多液體。立即將膜的樣品面向上,放置到處于水平桌面上的潔凈容器內(nèi)或保鮮膜上。

13. 在尼龍膜的表面小心加上步驟11配制好的共10ml BeyoECL Moon工作液,使工作液*覆蓋尼龍膜。室溫放置2-3分鐘。

14. 取出尼龍膜,用吸水紙吸去過多液體。將尼龍膜放在兩片保鮮膜或其它適當(dāng)?shù)耐腹獗∧ぶ虚g,并固定于壓片暗盒(也稱片夾)內(nèi)。

15. 用X光片壓片1-5分鐘。可以先壓片1分鐘,立即顯影定影,然后根據(jù)結(jié)果再調(diào)整壓片時(shí)間;也可以直接分別壓片30秒、1、3、5分鐘或更長時(shí)間,然后一起顯影定影觀察結(jié)果。

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常見問題:

1. 背景較高。

可能是由于封閉液或洗滌液中出現(xiàn)沉淀或混濁。解決方法是參考使用說明,加熱封閉液和洗滌液使封閉液和洗滌液*溶解。

2. 出現(xiàn)斑點(diǎn)狀背景。

可能是由于過長時(shí)間存放導(dǎo)致Streptavidin-HRP Conjugate中出現(xiàn)沉淀,解決方法是12000-14000g離心1分鐘再吸取近液面的Streptavidin-HRP Conjugate。轉(zhuǎn)膜時(shí)有氣泡也會(huì)導(dǎo)致斑點(diǎn)狀背景產(chǎn)生,解決方法是轉(zhuǎn)膜時(shí)膠、膜、濾紙之間確保沒有氣泡。

3. 沒有條帶或信號(hào)很弱。

A. 探針標(biāo)記效率太低,解決方法是檢測(cè)探針標(biāo)記效率,確保探針的標(biāo)記效率較高。

B. 探針用量不足或樣品量不足,解決方法是加大探針用量或加大樣品用量。

C. 樣品中待檢測(cè)的核酸降解,解決方法是檢測(cè)待檢測(cè)的核酸樣品是否出現(xiàn)降解,如降解則須制備新的樣品。

D. 轉(zhuǎn)膜效果不佳,解決方法是檢查轉(zhuǎn)膜的方法和步驟,使用預(yù)染的標(biāo)準(zhǔn)品作為轉(zhuǎn)膜的對(duì)照。

E. 選擇了不適當(dāng)?shù)哪?,盡管不少情況下硝酸纖維素膜也可以完成檢測(cè),請(qǐng)優(yōu)先選擇帶正電荷的尼龍膜。

F. 檢測(cè)過程中膜干掉了,解決方法是確保檢測(cè)過程中膜可以被液體覆蓋或始終保持濕潤。

G. 沒有交聯(lián)或交聯(lián)效果不佳,解決方法是進(jìn)行適當(dāng)?shù)慕宦?lián),如果交聯(lián)效果不佳則須檢測(cè)交聯(lián)的效率。

H. 洗滌液(5X)沒有稀釋就直接使用,請(qǐng)把洗滌液(5X)稀釋至1X后再使用。

I. X光片曝光時(shí)間不足,解決方法是適當(dāng)延長曝光時(shí)間。

保存條件:
      3308-3 Streptavidin-HRP Conjugate在-20℃保存,其余可4℃保存。如果長期不用,整個(gè)試劑盒可-20℃保存,-20℃可以保存更長時(shí)間。
      本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于研究診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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