檸檬酸測(cè)定試劑盒說(shuō)明書
分光光度法 50 管/48 樣
測(cè)定意義?
CA 是生物體內(nèi)常見的有機(jī)酸?是重要的食品風(fēng)味物質(zhì)??外?CA 是?羧酸循??反
應(yīng)的產(chǎn)物?
測(cè)定原理?
酸性條件??檸檬酸還原 Cr 6+ 生成 Cr 3+ ?在 545nm 處有特征吸收峰?通過(guò)測(cè)定 545nm 吸光
值的增加?即可?算出樣品中檸檬酸含??
自備儀器和用品?
可見分光光度??低溫離心機(jī)?水浴鍋?可調(diào)式移液槍?1mL 玻璃比色皿和蒸餾水?
試劑組成和配置?
試劑一?液體×1 瓶?4℃保存?
試劑??液體×1 瓶?4℃保存?
試劑??液體×1 支??20℃保存?
試劑四?粉劑×1 瓶?室溫保存?臨用前配制?加入 5mL 試劑一?充分溶解?
試劑五?液體×1 瓶?4℃避光保存?
標(biāo)準(zhǔn)品?液體×1 支?250µmol/L 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液?4℃保存?
樣品中檸檬酸提取?
1. 液體樣品中檸檬酸提取?取 0.1mL 液體加試劑一 0.9mL?充分混勻?11000g? 4℃離心
10min?取?清液?待測(cè)?
2. 組?中檸檬酸提取?按照組?質(zhì)??g??提取液體?(mL)為 1?5~10 的比例?建議?取
約 0.1g 組??加入 1mL 試劑一?進(jìn)行冰浴勻漿?11000g?4℃離心 10min?取?清置冰
?待測(cè)?
3. 線粒體中檸檬酸提取?按照組?質(zhì)??g??提取液體?(mL)為 1?5~10 的比例?建議?
取約 0.1g 組??加入 1mL 試劑一?進(jìn)行冰浴勻漿?600g/min?4℃離心 5min?取?清?
另一 EP 管中?11000g?4℃離心 10min?棄?清 ???清液可用于?胞質(zhì) CA ? 含?測(cè)定??
向沉淀中加試劑? 200µl?以及試劑? 2µl?充分懸浮溶解?11000g?4℃離心 10min?
取?清液?待測(cè)