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360次蛋白實(shí)驗(yàn)中的常見問(wèn)題
1、蛋白樣品不能反復(fù)凍融；
2、蛋白樣品應(yīng)加蛋白酶抑制劑，以增加蛋白的穩(wěn)定性；
3、細(xì)胞水平要做 Western Blot，一般地 5×106 個(gè)細(xì)胞提取的蛋白夠就足 Western Blot；
4、如果目標(biāo)蛋白是膜蛋白和胞漿蛋白，所用的去垢劑就要溫和得多，建議提取后加上 NaF 去抑制磷酸化酶的活性；
5、若轉(zhuǎn)膜不*，可以加大上樣量，還有轉(zhuǎn)移時(shí)你可以用降低電流延長(zhǎng)時(shí)間，轉(zhuǎn)膜液中甲醇的比例多加 5－10％；
6、如果上樣量超載，可以濃縮樣品，也可以根據(jù)你的目標(biāo)分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地，超載 30％是不會(huì)有問(wèn)題的。如果已經(jīng)超了不少了，而且小分子量的也要，可以考慮加大膠的厚度，可以試試 1.5mm 的 comb；
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