久久久久亚洲精品男人的天堂,日本韩国男男作爱GAYWWW,特黄AAAAAAA片免费视频,av天堂电影网

上海信帆生物科技有限公司
中級會員 | 第13年

13764793648

基質(zhì)金屬蛋白酶/明膠酶譜法試劑盒
ELISA試劑盒
干擾物質(zhì)
血清及相關(guān)類產(chǎn)品
生化法試劑盒
實驗代測服務(wù)項目
質(zhì)控品/校準品
RIA免疫檢測
品牌生化試劑
檢測試劑盒
抗體和抗原
胰島素(Insulin)試劑盒
補體蛋白試劑盒
腫瘤壞死因子elisa試劑盒
白介素Elisa試劑盒
化學溶液
檢測試劑
GIBCO培養(yǎng)基
商城
染色試劑
試劑
生化指示劑
標準物質(zhì)
科研用二抗
動物紅細胞懸液
生物試劑
染色液
科研細胞
生化試劑
生化實驗代測
細胞因子及重組蛋白
合成多肽

PCR擴增反應(yīng)三部曲以及DNA(靶序列)的制備的步驟

時間:2015/8/18閱讀:3051
分享:

聚合酶鏈式反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction PCR)是一種體外擴增特異性DNA片段的技術(shù)。它可以在體外特異地對目的基因進行大量擴增,其巧妙之處在預(yù)先設(shè)計合成二段分別與待測目的基因二端互補的引物,以起到指向定點的作用;再借助于DNA聚合酶催化的若干次擴增反應(yīng)后,即可使特定的基因片段成百萬倍的擴增。擴增反應(yīng)分三步:
①變性:當通過加熱使DNA雙螺旋的氫鍵斷裂,雙鏈解離形成單鏈DNA。
②褪火:當溫度突然降低時由于模板分子結(jié)構(gòu)較引物要復(fù)雜得多,而且反應(yīng)體系中引物DNA量大大多于模板DNA,使引物和其互補的模板在局部形成雜交鏈,而模板DNA雙鏈之間互補的機會較少。
③延伸:在DNA聚合酶和4種脫氧核糖核苷三磷酸底物,以及Mg2+存在的條件下,
以引物為起始點,從5′→3′催化的DNA鏈延伸反應(yīng)。
以上3步為一個循環(huán),每一循環(huán)的產(chǎn)物可以作為下一循環(huán)的模板,若干次循環(huán)之后,介于兩個引物之間的特異性DNA片段就得到了大量的復(fù)制,數(shù)量可達2×107~8拷貝,PCR的實驗操作包括模板DNA(或RNA)的制備、引物的設(shè)計合成、酶促聚合反應(yīng)、反應(yīng)產(chǎn)物的檢測等。
操作步驟
模板DNA(靶序列)的制備
進行PCR擴增反應(yīng)的模板可以是人體組織細胞的染色體DNA,微生物的DNA,或是由mRNA反轉(zhuǎn)錄而成的cDNA等。本實驗用小鼠肝臟制備染色體DNA作為PCR擴增的模板。
1. 取肝組織0.5g加入2ml裂解液。
2. 冰浴勻漿。
3. 取勻漿液200μl加入裂解液200μl。
4. 加入蛋白酶k至終末濃度為100μg/ml。
5. 以上溶液在65℃保溫數(shù)小時或過一夜,不時震搖。
6. 加入75μl 8M KAC,混勻。
7. 在4℃放置15分鐘。
8. 加入750μl氯仿。
9. 經(jīng)充分震搖后5 000rpm、離心5分鐘,將上清液轉(zhuǎn)入一新的Eppenderf管,沉淀棄去。
10. 加入750μl無水乙醇,充分混勻,-20℃靜置30分鐘。
11. 12 000rpm、離心10分鐘,棄去上清,沉淀用500μl 70%乙醇洗一次,10 000rpm、再離心5分鐘,棄去上清,于室溫將有DNA沉淀的Eppendorf管敞開15~30分鐘,使痕量乙醇揮發(fā)。
12. 將DNA沉淀團塊溶于100μl TE緩沖液,加RNA酶1μl,在37℃水浴放置30分鐘。
13. 用等體積的酚/氯仿抽提一次。
14. 取上清,加入1/10體積的NaAc(pH4.8)和2倍體積的無水乙醇,混勻。
15. 12 000rpm、離心10分鐘,棄去上清,沉淀用500μl 70%乙醇洗一次,10 000rpm,再離心5分鐘,棄去上清,于室溫將有DNA沉淀的Eppendorf管敞開15~30分鐘,使痕量乙醇揮發(fā)。溶于50μl TE。
16. 取1μl樣品用500μl雙蒸水稀釋,在260nm和280nm處測定吸光度。鑒定樣品純度并計算其含量。
17. 將DNA溶液保存于-20℃?zhèn)溆谩?/P>

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
撥打電話
在線留言
国产精品国产三级国产普通话| 波多野结衣高潮喷水在线观看| 久久久久久久久久久久久99| 亚洲最大成人网色| 丁香花在线观看免费观看图片| 日韩欧美中文在线| 欧美mv日韩mv亚洲精品| 欧美午夜精品久久久久久浪潮| 中国XXXXXL免费| 日韩中文字幕在线二区| 国产精品久久久久久亚洲影视| 欧美日韩 久久| 国产成人91亚洲精品| 男人扒开你的下面狂躁的视频| 一路向北高清完整版免费观看| 欲香欲色天天天综合和网| 97在线观看视频| 亚洲午夜片子大全精品| 亚洲av色香蕉一二三区| 99久久国产热无码精品免费| 娇妻玩4P被三个男人伺候电影| 欧美日韩性生活大片| 朋友的丰满人妻| 67194永久免费网站在线观看| 欧美激情一区二区亚洲专区| 5278欧美一区二区三区| 在线观看伦理片| 美女100露胸无遮挡照片| 中文字幕,人妻系列.| 欧美人妻精品一区二区三区| 99国产精品永久免费视频| 麻豆人妻少妇精品无码专区| 99精品国产福利在线观看| 亚洲午夜久久久久久久久电影网| 好大水好多好爽好硬好深视频| 色综合欧美在线视频区| 国产69精品久久久久999三级| AV免费网站在线观看| 亚洲国产av一区| 国产欧美精品一二三区| 色一情一乱一伦一区二区三区 |