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丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒的測(cè)定步驟,注意事項(xiàng)以及計(jì)算方法

時(shí)間:2015/8/10閱讀:1890
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上海信帆生物代理銷售“丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒",現(xiàn)貨供應(yīng),提供技術(shù)指導(dǎo)和售后服務(wù),歡迎。

測(cè)定步驟

  1. 調(diào)零

用蒸餾水于605nm處調(diào)零。

  1. 樣本測(cè)定

1)取900μL工作液加入1mL玻璃比色皿,在37℃哺乳動(dòng)物)25℃(其它物種)中孵育5min

2)取出比色皿,加入50μL酶液,混勻;立即記錄605nm處初始吸光值A1,37℃哺乳動(dòng)物)25℃(其它物種)中準(zhǔn)確反應(yīng)1min,記錄605nm1min后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒注意事項(xiàng)

1、測(cè)定過(guò)程中所有試劑和樣本在冰上放置,以免變性和失活。

2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持3725,取小燒杯一只裝入一定量的3725蒸餾水,將此燒杯放入3725水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

3、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

PDH活性計(jì)算

1、組織中PDH活性計(jì)算:

1 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

 PDH活性(U/mg prot=反應(yīng)總體積(950μL÷樣本體積(50μL÷反應(yīng)時(shí)間(1min)÷2,6-二氯吲哚酚消光系數(shù)(21×10-3×ΔA ÷蛋白濃度(mg/mL)=905×ΔA÷蛋白濃度(mg/mL)

2 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

 PDHU/g 鮮重=反應(yīng)總體積(950μL÷樣本體積(50μL÷反應(yīng)時(shí)間(1min)÷2,6-二氯吲哚酚消光系數(shù)(21×10-3×ΔA ÷樣本鮮重(g/mL)=905×ΔA ÷樣本鮮重(g/mL)

2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞中PDH活性計(jì)算:

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

 PDH活性(U/mg prot=反應(yīng)總體積(950μL÷樣本體積(50μL÷反應(yīng)時(shí)間(1min)÷2,6-二氯吲哚酚消光系數(shù)(21×10-3×ΔA ÷蛋白濃度(mg/mL)=905×ΔA÷蛋白濃度(mg/mL)

2 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個(gè)酶活性單位。

PDH活性(U/104 cell=反應(yīng)總體積(950μL÷樣本體積(50μL÷反應(yīng)時(shí)間(1min)÷2,6-二氯吲哚酚消光系數(shù)(21×10-3×ΔA ÷細(xì)菌或細(xì)胞密度(104 cell /mL)=905×ΔA÷細(xì)菌或細(xì)胞密度(104 cell /mL)

丙酮酸脫氫酶(PDH)試劑盒

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