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上海信帆生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第13年

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乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒的試劑組成以及操作列表

時(shí)間:2015/7/27閱讀:1952
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上海信帆生物代理銷售“乳酸脫氫酶LDH試劑盒",現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎大家。

乳酸脫氫酶Lactate Dehydrogenase,LDH試劑盒

測(cè)定意義:

LDHEC 1.1.1.27)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。

測(cè)定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:30mL×1瓶, 4保存;

試劑一:液體15 mL×1 4保存;

試劑二:粉劑×1支,-20保存,用時(shí)加入1.3 mL雙蒸水充分溶解備用,配好后-20 保存,可保存兩周,禁止反復(fù)凍融;

試劑三:液體15 mL×1瓶,4保存;

試劑四:液體50 mL×1L,4保存;

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:

1 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),棄上清,按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次)。8000g,4離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液或者生理鹽水進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

測(cè)定操作表(在1mL EP管中反應(yīng))

試劑名稱(μL)

測(cè)定管

對(duì)照管

待測(cè)樣本

50

50

試劑一

250

250

試劑二

50


蒸餾水


50

充分混勻,37(哺乳動(dòng)物)或25(其它物種)水浴15min

試劑三

250

250

充分混勻,37(哺乳動(dòng)物)或25(其它物種)水浴15min

試劑四

750

750

充分混勻,室溫靜置3分鐘,450 nm下測(cè)定吸光度

注意事項(xiàng):

1、粗酶液的提取必須在0 - 4中操做完成,以防止酶變性失活。測(cè)定過(guò)程中樣本﹑試劑二和標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液必須在冰上放置。

3、由于每個(gè)樣本都要做測(cè)定管和對(duì)照管,因此本試劑盒50管可測(cè)24個(gè)樣本。

LDH活力單位的計(jì)算:

1、血清(漿)LDH活力的計(jì)算

單位的定義:每升血清(漿)與基質(zhì)作用15分鐘,在反應(yīng)體系中生成1 μmol的丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDHU/L=1379×A測(cè)定管-A對(duì)照管)

2、組織中LDH活力的計(jì)算

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白與基質(zhì)作用15分鐘,在反應(yīng)體系中生成1 nmol的丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDHU/mg prot=1379×A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷蛋白濃度(mg/mL

2 按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織與基質(zhì)作用15分鐘,在反應(yīng)體系中生成1 nmol的丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDHU/g 鮮重=1379×A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷樣本鮮重(g/mL

3、細(xì)菌或細(xì)胞中LDH活力的計(jì)算:

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白與基質(zhì)作用15分鐘,在反應(yīng)體系中生成1 nmol的丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDHU/mg prot=1379×A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷蛋白濃度(mg/mL

2)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞與基質(zhì)作用15分鐘,在反應(yīng)體系中生成1 nmol的丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDHU/104 cell=1379×A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷細(xì)菌或細(xì)胞密度(104 cell /mL


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