長時程活細胞成像Incucyte®是一款革命性的細胞成像設(shè)備，能夠在培養(yǎng)箱內(nèi)實現(xiàn)無限時間的連續(xù)觀察。其傻瓜式的實驗設(shè)置和分析流程，以及精準的細胞指標計算，使得眾多用戶對其愛不釋手。Incucyte®在細胞水平的體外實驗中有著廣泛應(yīng)用。
事實勝于雄辯，用文章數(shù)量說話！在2024年第三季度，陳老師下載了數(shù)十篇包含Incucyte®數(shù)據(jù)的國內(nèi)文章（文獻列表在文末哦?。?。
表1. 2024 Q3 Incucyte®文章第一作者單位分布
從文章的分布單位來看，很多單位在一個季度內(nèi)就發(fā)了多篇文章，例如澳門大學(xué)，濱州醫(yī)學(xué)院以及電子科技大學(xué)等。利用Incucyte®，研究人員可以高效地獲得實時的細胞信息，并快速地獲得可信的研究成果。足以說明Incucyte®因其簡單易用和短時間內(nèi)生成多維精準數(shù)據(jù)，是發(fā)表高質(zhì)量研究文章的利器！
表2. 2024 Q3的Incucyte®文章應(yīng)用分布
Incucyte®應(yīng)用非常廣泛，從這些文章中可以看出，除了傳統(tǒng)的細胞增殖活性和劃痕遷移實驗外，還有類器官、吞噬和內(nèi)化等多種應(yīng)用。
陳老師就選幾篇比較典型的國內(nèi)文章介紹一下
最新應(yīng)用
類器官制備外泌體
北大三院[1]
唾液來源的外泌體可加速傷口修復(fù)，但由于口腔環(huán)境復(fù)雜，提取較為困難。作為一種可行的替代方案，本文建立了人類小唾液腺類器官（hMSG-ORG）來產(chǎn)生外泌體 （MsOrg-Exo）。在體外實驗中，MsOrg-Exo 顯著增強了細胞增殖、遷移和血管生成能力。MsOrg-Exo 促進傷口部位的增殖、血管生成和生長因子的分泌。Incucyte®用來追蹤類器官的生長以及細胞的增殖情況。
圖1. 連續(xù)跟蹤單細胞生長。在第三天觀察到直徑約為 100 μm 的小球形腺泡狀類器官的形成。隨后，腺泡的面積逐漸增加，培養(yǎng)兩周后直徑達到 1-2 mm
為了驗證 hMSG-ORGs 是否可以在體外模擬唾液腺功能，研究使用毒蕈堿受體激動劑卡巴膽、β受體激動劑異丙腎上腺素和非膽堿能肽神經(jīng)遞質(zhì)VIP進行了功能性腫脹測定。Incucyte®結(jié)果顯示，在給藥后 2 小時內(nèi)，hMSG-ORGs 中腺泡樣結(jié)構(gòu)顯著腫脹，而用 DMSO 處理的 hMSG-ORG 未觀察到顯著變化，這表明 hMSG-ORGs 可以在體外對不同的神經(jīng)遞質(zhì)刺激做出反應(yīng)。
圖2. Incucyte® 在 5 小時內(nèi)以 2 分鐘的間隔捕獲類器官的明場圖像
將 HUVEC、HaCaT 和 HSF 細胞以 3000個細胞/孔的密度接種，然后用MsOrg-Exo處理。在接下來的 500 小時內(nèi)，使用 Incucyte® 系統(tǒng)每小時測量一次每個孔的細胞面積。
圖3. 用 MsOrg-Exo 處理的 HUVEC、HaCaT 和 HSF 細胞的增殖測定，Incucyte® 在 36 小時內(nèi)連續(xù)跟蹤細胞生長區(qū)域 （N = 3），可見MsOrg-Exo可以促進細胞的增殖。
Incucyte®可以對類器官進行層掃拍攝，最快可以幾分鐘間隔拍攝。
最多數(shù)據(jù)
化療耐藥與FTO
盛京醫(yī)院[2]
化療耐藥是神經(jīng)母細胞瘤（NB）患者治療失敗的重要原因，直接影響患者的預(yù)后。本文研究了脂肪量和肥胖相關(guān)基因（FTO）在NB細胞對各種化療藥物的化療敏感性中的作用。FTO過表達抑制細胞增殖，而FTO敲低促進NB細胞增殖。FTO的下調(diào)降低了NB細胞對紫杉醇的敏感性，而FTO的上調(diào)增強了其敏感性。此外，F(xiàn)TO表達較低和較高的患者對各種化療藥物或小分子抑制劑的敏感性不同。這一發(fā)現(xiàn)可能指導(dǎo)醫(yī)生和患者選擇合適的化療藥物或小分子抑制劑進行治療。文中多數(shù)數(shù)據(jù)都是Incucyte®生成的！
圖4. 左圖為兩種NB細胞系的生長曲線，中圖為終點計算結(jié)果，右圖為原始圖（黃色為細胞識別）
兩個實驗組差別不大，但是Incucyte®對群體細胞增殖分析結(jié)果具有良好的重復(fù)性，可以判定微小差別實驗組之間的顯著性。
最高影響因子
巨噬細胞活化機制
首都醫(yī)科大學(xué)[3]
人組蛋白macroH2A1.2整合到核小體中不會影響它們的穩(wěn)定性或折疊動力學(xué)，但它顯著阻礙了促進染色質(zhì)轉(zhuǎn)錄（FACT）功能。本文發(fā)現(xiàn)FACT有效地降低了macroH2A1.2-核小體的穩(wěn)定性，確定了macroH2A1.2 中的殘基S139A突變是調(diào)節(jié)FACT在核小體維持功能的關(guān)鍵開關(guān)。S139A突變重塑macroH2A分布并影響刺激誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄和巨噬細胞中的細胞反應(yīng)。本文闡明了macroH2A1.2和FACT在核小體水平上錯綜復(fù)雜的相互作用機制，并闡明了它們在巨噬細胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控和免疫反應(yīng)中的作用。
圖5. Incucyte®測試發(fā)現(xiàn)：將PE標記的磁珠和巨噬細胞混合，發(fā)現(xiàn)S139A突變后的巨噬細胞的吞噬能力減弱。15分鐘拍攝一次，20倍鏡，共拍攝360次。
拍攝360次，人工操作是不可能的呢！
Incucyte®長時程活細胞
成像系統(tǒng)應(yīng)用文集
為了將Incucyte®推廣到更多活細胞實驗，我們致力于提供全面的應(yīng)用解決方案?！禝ncucyte® 長時程活細胞成像系統(tǒng)應(yīng)用文集》除了基礎(chǔ)的細胞增殖和活性監(jiān)測外(如細胞凋亡/周期/毒性等)，還涵蓋了抗體內(nèi)化、旁觀者效應(yīng)、共培養(yǎng)殺傷、炎癥反應(yīng)(NETosis)、細胞吞噬、劃痕實驗、細胞趨化、類器官研究、腫瘤球分析、神經(jīng)突生長、 ATP 檢測、線粒體膜電位、病毒/脂質(zhì)體/外泌體監(jiān)測、全孔成像等多個方面。應(yīng)用范圍廣，是您尋找實驗方法的有利工具。
為什么Incucyte®那么火熱呢？
培養(yǎng)箱內(nèi)無限時間的連續(xù)觀察，最短幾分鐘間隔拍攝，減少人力，防止過多操作對細胞的傷害
6個板位，分別獨立設(shè)置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高
高效簡便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標多參數(shù)
> 100種優(yōu)化過的配套熒光試劑和耗材及詳盡的protocol
一句話：放好您的細胞，其他交給Incucyte®吧！
-參考文獻-
[1]GelMA loaded with exosomes from human minor salivary gland organoids enhances wound healing by inducing macrophage polarization | Journal of Nanobiotechnology (springer.com)
[2]Frontiers | FTO diversely influences sensitivity of neuroblastoma cells to various chemotherapeutic drugs (frontiersin.org)
[3]FACT mediates the depletion of macroH2A1.2 to expedite gene transcription: Molecular Cell
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