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臺盼藍染色液 Typan Blue Solution

臺盼藍（Trypan Blue），一種偶氮、親水性酸性藍色染料，可透過死亡細(xì)胞和垂死細(xì)胞的細(xì)胞膜，將其染成藍色，而活細(xì)胞由于其細(xì)胞膜的完整性，可將臺盼藍排斥在外，因此，通過顏色的變化即可將活細(xì)胞（活細(xì)胞呈透明無色）和死細(xì)胞鑒別開來，基于此原理，本品廣泛用于細(xì)胞活性水平的常規(guī)評估。臺盼藍還可染色膠原和淀粉樣蛋白。臺盼藍與蛋白結(jié)合形成的復(fù)合物可發(fā)出紅色熒光。另外，臺盼藍（合適濃度）還常用來淬滅細(xì)胞表面的自熒光或者其他熒光信號。

本品為溶于生理鹽溶液的0.4%（w/v）臺盼藍染色液，以無菌形式提供，細(xì)胞培養(yǎng)級別。

運輸和保存方法

室溫運輸和保存即可，二年有效。

注意事項

1）細(xì)胞計數(shù)前，需要用生理鹽緩沖液或者無血清培養(yǎng)基對細(xì)胞進行充分的清洗，因為細(xì)胞對血清蛋白具有非常高的親和力，殘留的血清蛋白會導(dǎo)致較暗的染色背景。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）對于懸浮細(xì)胞，離心收集細(xì)胞，充分清洗后，用適當(dāng)緩沖液如PBS，HBSS重懸制成單細(xì)胞懸液；對于貼壁細(xì)胞，先用胰|酶消化細(xì)胞，再按照懸浮細(xì)胞的方法制備單細(xì)胞懸液。

2）取0.5ml單細(xì)胞懸液，按照1:1比例與0.5ml 0.4%臺盼藍染色液充分混勻，室溫染色3~10min。

【注1】：因臺盼藍具有細(xì)胞毒性，染色時間過久會導(dǎo)致部分死細(xì)胞染色，干擾計數(shù)。

【注2】：若細(xì)胞密度比較高，可取0.2ml單細(xì)胞懸液，經(jīng)適當(dāng)緩沖液稀釋到0.5ml，之后再用0.5ml 0.4%臺盼藍染色液染色。

3）取少量上述染色細(xì)胞加入血細(xì)胞|計數(shù)板，于顯微鏡低倍鏡下計數(shù)，分別計算著色細(xì)胞（即損傷細(xì)胞和死細(xì)胞）和總細(xì)胞。

【注1】：用移液槍加染色細(xì)胞時，沿著蓋玻片的邊緣輕輕加液使其*覆蓋住整個小室。不可過量加液或者不足量。

【注2】：1mm2方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)通常控制在20-50 cells，當(dāng)細(xì)胞數(shù)超過200個，需重新調(diào)整稀釋倍數(shù)。

4）按照以下公式來計算細(xì)胞數(shù)目和活細(xì)胞百分比，

a，計算每ml細(xì)胞數(shù)目：Cells/ml=1mm2大方格內(nèi)的平均細(xì)胞數(shù)×稀釋倍數(shù)×104；【注】：此時的稀釋倍數(shù)為：步驟2所取的單細(xì)胞懸液與臺盼藍染色液混合后的稀釋倍數(shù)

b，總細(xì)胞數(shù)目：Total cells=（Cells/ml）×zui初制備單細(xì)胞懸液的總體積

c，細(xì)胞活力值：Viability（%）=（總細(xì)胞數(shù)-總著色細(xì)胞數(shù)）/總細(xì)胞數(shù) ×100

【注】：通常情況，健康的對數(shù)期培養(yǎng)細(xì)胞，活細(xì)胞至少占到95%。

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