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NGS在腫瘤檢測(cè)中的那些事兒一、背景介紹20世紀(jì)以來(lái)，癌癥已成為困擾人類健康的主要危害之一。根據(jù)2019年國(guó)家癌癥中心發(fā)布的2015年全國(guó)//////新癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，2015年惡性腫瘤發(fā)病約392.9萬(wàn)人，死亡約233.8萬(wàn)人。平均每天超1萬(wàn)人被確診為癌癥，每分鐘7.5個(gè)人確診癌癥。癌癥負(fù)擔(dān)呈持續(xù)上升態(tài)勢(shì)，近10多年來(lái)，惡性腫瘤發(fā)病率每年保持約3.9％的增幅，死亡率每年保持2.5％的增幅。因而腫瘤基因突變檢測(cè)對(duì)指導(dǎo)腫瘤靶向治療、耐藥監(jiān)測(cè)及預(yù)后判斷有重要意義。圖1：中國(guó)2015年惡性腫瘤發(fā)病與死亡
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干貨分享|磁珠常見問(wèn)題與解決方案高通量測(cè)序技術(shù)的跨越式發(fā)展，使測(cè)序能力大幅上升。在整個(gè)NGS工作流程中，磁珠是*的產(chǎn)品。磁珠通過(guò)磁顆?；钚曰鶊F(tuán)在一定條件下可與核酸結(jié)合和解離的原理，將樣本中目的片段分離?？蓪?shí)現(xiàn)對(duì)核酸樣本的高通量自動(dòng)化操作，廣泛應(yīng)用于基因測(cè)序以及分子診斷領(lǐng)域?？雌饋?lái)很簡(jiǎn)單的純化/分選實(shí)驗(yàn)，卻在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中有各種意外的情況。那關(guān)于磁珠產(chǎn)品選擇和產(chǎn)品使用方面有什么需要注意的事項(xiàng)呢？接下來(lái)小翊將從磁珠的外觀、儲(chǔ)存、應(yīng)用和使用效果逐一對(duì)癥分析，希望能幫助大家了解磁珠實(shí)驗(yàn)中的那些事。磁珠外觀Q
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Western blot所必須的內(nèi)參及標(biāo)簽抗體
Westernblot所必須的內(nèi)參及標(biāo)簽抗體——衡量WB成功的標(biāo)尺何為內(nèi)參抗體、何為標(biāo)簽抗體？一內(nèi)參抗體內(nèi)參即內(nèi)部參照（InternalControl），類似于熒光定量實(shí)驗(yàn)的內(nèi)參基因，對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)來(lái)說(shuō)一般是指由看家基因編碼表達(dá)的蛋白(HousekeepingProteins)，它們?cè)诓煌M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，常用它作為檢測(cè)目的蛋白表達(dá)水平變化時(shí)來(lái)做參照物。2內(nèi)參抗體的選擇：（1）樣本種屬來(lái)源哺乳動(dòng)物的組織或者細(xì)胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lami -
D-熒光素原理D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應(yīng)用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過(guò)量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，導(dǎo)入研究動(dòng)物如大、小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過(guò)生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來(lái)檢測(cè)光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體
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轉(zhuǎn)鐵蛋白（Transferrin）------無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)添加物背景介紹轉(zhuǎn)鐵蛋白又名運(yùn)鐵蛋白（Transferrin，TRF、Tf），負(fù)責(zé)運(yùn)載由消化管吸收的鐵和由紅細(xì)胞降解釋放的鐵。以三價(jià)鐵復(fù)合物（Tf-Fe3+）的形式進(jìn)入骨髓中，供成熟紅細(xì)胞的生成。轉(zhuǎn)鐵蛋白主要存在于血漿中，血漿中的轉(zhuǎn)鐵蛋白供應(yīng)機(jī)體絕大部分組織的鐵，而在其不能到達(dá)的部位，由這些組織自己合成的轉(zhuǎn)鐵蛋白在局部產(chǎn)生轉(zhuǎn)鐵作用。圖1:轉(zhuǎn)鐵蛋白的結(jié)構(gòu)人轉(zhuǎn)鐵蛋白（HumanTransferrin）主要在肝臟合成，是由位于同源N-端和C-端
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免疫球蛋白G（IgG）——模擬抗體活性，神似抗體結(jié)構(gòu)免疫球蛋白免疫球蛋白（Ig）指具有抗體（Ab）活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)，與抗體分子相似的球蛋白。免疫球蛋白是由兩條相同的輕鏈和兩條相同的重鏈通過(guò)鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結(jié)構(gòu)。免疫球蛋白分為五類，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。圖1五類免疫球蛋白結(jié)構(gòu)示意圖IgG簡(jiǎn)介免疫球蛋白G（ImmunoglobulinG，IgG）是血清中免疫球蛋白主成分，約占血清中免疫球蛋白總
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qPCR常見問(wèn)題及解決方案對(duì)于從事分子生物學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)猿來(lái)說(shuō)，RT-qPCR實(shí)驗(yàn)可謂是老生常談了。看似風(fēng)平浪靜，只需“RNA提取-反轉(zhuǎn)錄-熒光定量”這些按部就班的操作，實(shí)則險(xiǎn)象環(huán)生，一丁點(diǎn)的出錯(cuò)都有可能讓我們懷疑人生。即便如此，在CNS的召喚下我們?nèi)耘f一遍遍的重復(fù)、重復(fù)、再重復(fù)。小翊深有體會(huì)，為此嘔心瀝血整理出來(lái)常用的SYBRGreen染料法RT-qPCR實(shí)驗(yàn)的幾個(gè)常見問(wèn)題，并給出了可能的原因和解決方案，希望大家能夠順利度過(guò)RT-qPCR大關(guān)。RT-qPCR實(shí)驗(yàn)中，大家或多或少會(huì)遇到擴(kuò)增曲線異常
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抗體親和純化系列產(chǎn)品概述ProteinA、ProteinG是常應(yīng)用于抗體親和純化和免疫沉淀的蛋白。將ProteinA、G分別固定在不同的介質(zhì)上，或同時(shí)將ProteinA、G共價(jià)偶聯(lián)到介質(zhì)表面，是從腹水、細(xì)胞培養(yǎng)物上清和血清中分離IgG和IgG亞家族的有效工具。ProteinL源于細(xì)菌，能更廣泛地結(jié)合各種類型以及亞類的免疫球蛋白，包括所有類型的IgG和單鏈可變區(qū)(ScFv)以及Fab片段。該蛋白只與抗體的kappa鏈結(jié)合而不會(huì)影響抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)，這一特性使其與蛋白A或蛋白G相比，能更廣泛地結(jié)合
