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Dextran Sulfate Sodium Salt（DSS） 潰瘍性結(jié)腸炎模型的建立
DSS 造模發(fā)展歷程
目前有多種動(dòng)物模型被廣泛用于研究炎癥性腸炎（inflammatory bowel disease，IBD）的病因、發(fā)病機(jī)制及測(cè)試新開發(fā)藥物藥效等，尤其以葡聚糖硫酸鈉鹽（Dextran Sulfate Sodium Salt，DSS MW:36000~50000）結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）模型應(yīng)用廣。
圖1. DSS潰瘍病結(jié)腸炎模型發(fā)展歷程
DSS建構(gòu)的UC模型特點(diǎn)
通過(guò)給予動(dòng)物自由飲用不同濃度的DSS（MW:36000~50000）水溶液，根據(jù)用藥時(shí)間及用藥周期可制成急性和慢性兩種結(jié)腸炎模型。該模型癥狀表現(xiàn)與人類UC極為相似，主要表現(xiàn)為腹瀉、黏液樣便、糞便潛血、肉眼血便、重量減輕、活動(dòng)度減少，毛色變差等。
DSS結(jié)腸炎模型類別 急性期結(jié)腸炎模型 慢性期結(jié)腸炎模型 組織學(xué)改變 結(jié)腸充血、水腫、變短、變脆、重量長(zhǎng)度比增加 結(jié)腸明顯縮短 出現(xiàn)不同程度的結(jié)腸潰瘍 粘膜增厚、淋巴結(jié)腫大 黏膜水腫、杯狀細(xì)胞缺失、隱窩腫脹破壞 杯狀細(xì)胞缺失、隱窩缺失 黏膜和黏膜下層出現(xiàn)不同程度的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，上皮細(xì)胞損傷 小部分動(dòng)物出現(xiàn)腺瘤肉、腫瘤樣改變 DSS UC模型的優(yōu)勢(shì)
表1 DSS結(jié)腸炎模型組織學(xué)特征
1、癥狀表現(xiàn)與人UC極度相似，可用于研究急、慢性結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，也可用于藥物的藥效研究。
2、自由飲用DSS水溶液的建模方式，簡(jiǎn)單易行，成模率高，重復(fù)性強(qiáng)。
3、用不同濃度的DSS、給藥時(shí)間和給藥頻率，可以實(shí)現(xiàn)急性和慢性兩種結(jié)腸炎模型。模型持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，體現(xiàn)了急性向慢性轉(zhuǎn)化的動(dòng)態(tài)過(guò)程，解決了UC的慢性化和維持問(wèn)題，這是以前許多模型的。
4、多種屬動(dòng)物中均可造模：小鼠、大鼠、斑馬魚、豬、果蠅等。
5、聯(lián)合氧化偶氮甲烷 (azoxymethane, AOM)用藥，可用于誘發(fā)結(jié)腸炎相關(guān)性癌癥 (colitis associated cancer, CAC) 動(dòng)物模型，成功模擬IBD誘發(fā)CAC的過(guò)程。
DSS UC模型建構(gòu)實(shí)例
1、 小鼠造模（點(diǎn)擊了解實(shí)驗(yàn)步驟詳情）
1）BALB/c小鼠，雌，6-8周，25 g；
2）用無(wú)菌水配置3% DSS飲用水，然后用0.22 μm的濾膜過(guò)濾；
3）給小鼠連續(xù)飲用7天，HE染色；
4）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：小鼠的組織水腫充血，有明顯的炎癥現(xiàn)象。
圖2 DSS急性結(jié)腸炎切片HE染色結(jié)果[1]
2、 斑馬魚造模（點(diǎn)擊了解實(shí)驗(yàn)步驟詳情）
1）將斑馬魚胚胎培養(yǎng)在含甲基藍(lán)的E3胚胎培養(yǎng)基中，28.5 ℃，培養(yǎng)至1 dpf；
2）用E3培養(yǎng)基配置0.5% DSS飲用水，然后用0.22 μm的濾膜過(guò)濾；
3）用0.5%的DSS處理斑馬魚，從3 dpf處理到6 dpf。
4）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：0.5%的DSS藥物處理均會(huì)導(dǎo)致斑馬魚肝臟顏色變深，產(chǎn)生炎癥應(yīng)激。
圖3 DSS導(dǎo)致斑馬魚肝臟產(chǎn)生炎癥反應(yīng)[2]
3、豬造模（點(diǎn)擊了解實(shí)驗(yàn)步驟詳情）
1）四到五天大的約克郡小豬，實(shí)驗(yàn)組：灌注DSS，對(duì)照組：灌注生理鹽水
2）每只小豬每日攝入量1.25g DSS/kg，灌注5天
3）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：灌注DSS后，實(shí)驗(yàn)組的血漿D-甘露醇攝取率顯著高于對(duì)照組，表明小豬出現(xiàn)了肉眼可見(jiàn)的腸炎癥狀。
圖4 DSS誘導(dǎo)致小豬體內(nèi)D-甘露醇濃度高于對(duì)照組[3]
4、果蠅造模（點(diǎn)擊了解實(shí)驗(yàn)詳情）
1）實(shí)驗(yàn)組：5~10日的雌果蠅；
2）用5%的蔗糖溶液分別配制含有不同成分的喂食培養(yǎng)基，類別包括各含3%的DSS，25 μg/ml博來(lái)霉素；
3）果蠅放入含有層析紙的瓶中，29℃培養(yǎng)三天，期間每天將存活的果蠅移入含有新鮮培養(yǎng)基的空瓶中；
4）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：DSS有致死的功能，且DSS誘導(dǎo)ISC前體細(xì)胞增殖。
圖5 DSS誘導(dǎo)果蠅中ISC前體細(xì)胞增殖[4]
5、結(jié)直腸癌模型（點(diǎn)擊了解實(shí)驗(yàn)詳情）
1）第1天稱重并標(biāo)記小鼠，實(shí)驗(yàn)組小鼠腹腔注射偶氮甲烷 AOM（10 mg/kg）；
2）用常規(guī)飲用水喂食一周；
3）用2.5%濃度DSS替換飲用水喂食一周；
4）用常規(guī)飲用水喂食2周；
5）步驟3和步驟4重復(fù)3次。
如何評(píng)價(jià)造模是否成功？
1、疾病活躍指數(shù)評(píng)分（Disease Activity Index, DAI score）
從三個(gè)方面進(jìn)行評(píng)估打分，分別為體重、糞便粘稠度、糞便潛血等指標(biāo)，DAI評(píng)分為三個(gè)指標(biāo)之和。
表2. DAI評(píng)分細(xì)則
評(píng)分 | 體重下降百分比 | 糞便粘稠度 | 糞便潛血 |
0 | 0 | 正常 | 陰性 |
1 | 1-5% | 軟便 | 淺藍(lán) |
2 | 5-10% | 黏液樣便 | 藍(lán)色 |
3 | 10-20% | 稀液狀便 | 深藍(lán) |
4 | ＞20% | 肉眼血便 |
2、組織學(xué)變化評(píng)分
組織學(xué)變化評(píng)分為上述各指標(biāo)之和，在急性結(jié)腸炎模型中淋巴結(jié)形成不做評(píng)分。組織學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)方法為HE染色（Cat.NO：60524ES60）。
表3.組織學(xué)變化評(píng)分
評(píng)分 | 潰瘍（個(gè)） | 上皮細(xì)胞變化 | 炎癥浸潤(rùn) | 淋巴結(jié)（個(gè)） |
0 | 0 | 正常 | 無(wú) | 無(wú) |
1 | 1 | 杯狀細(xì)胞缺失 | 隱窩周圍浸潤(rùn) | 1 |
2 | 2 | 杯狀細(xì)胞大面積缺失 | 黏膜肌層出現(xiàn)浸潤(rùn) | 2 |
3 | 3 | 隱窩缺失 | 黏膜肌層普遍浸潤(rùn)，黏膜增厚 | 3 |
4 | ＞3 | 隱窩大面積缺失或息肉狀再生 | 黏膜下層浸潤(rùn) | ＞3 |
3、結(jié)腸長(zhǎng)度
急性結(jié)腸炎模型中，第8天可檢測(cè)到結(jié)腸長(zhǎng)度縮短；慢性結(jié)腸炎模型中，結(jié)腸長(zhǎng)度縮短更加明顯。
4、總結(jié)
DSS UC動(dòng)物模型構(gòu)建應(yīng)先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索建模條件，建議預(yù)實(shí)驗(yàn)每組樣本8-10只，并設(shè)立對(duì)照組。通常出現(xiàn)體重減輕、稀便、腹瀉、血便或糞便潛血、潰瘍可視為DSS藥物有效，造模成功。
翌圣 DSS 建模實(shí)例
翌圣提供高品質(zhì)DSS（Cat.NO：60316ES，MW:36000~50000），高純度（＞98%），硫含量17-19%，游離硫＜0.2%，大量數(shù)據(jù)文獻(xiàn)支持，廣泛應(yīng)用于UC模型的構(gòu)建。
建模效率與進(jìn)口產(chǎn)品一致，產(chǎn)品價(jià)格低至進(jìn)口價(jià)格的1/3，大量現(xiàn)貨庫(kù)存。
客戶1：
客戶來(lái)源：中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所(天津)
小鼠類型：6~8周雄性C57BL/6J小鼠
造模方法：1.5% (w/v) DSS自由飲用15天
圖7 Yeasen DSS（Cat#60316ES）小鼠造模實(shí)驗(yàn)結(jié)果（Yuan Li, et al. Gut Microbes（2019）789-806. IF=10.245）
客戶2：
客戶來(lái)源：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
小鼠類型：體重為 20~22 g的8周齡雄性C57BL/6小鼠
造模方法：3% (w/v) DSS自由飲用7天
圖8 Yeasen DSS（Cat#60316ES）小鼠造模實(shí)驗(yàn)結(jié)果（Xiaona Gao, et al. Journal of Nutritional Biochemistry 83 (2020) 108438. IF=6.048）
客戶3：
客戶來(lái)源：中國(guó)海洋大學(xué)
小鼠類型：4-5周齡SPF雄性C57BL/6J小鼠
造模方法：3.5% (w/v) DSS自由飲用一周
圖9 Yeasen DSS（Cat#60316ES）小鼠造模實(shí)驗(yàn)結(jié)果（Hao H,et al.Frontiers in Immunology.2021.777147. IF=7.561）
表4. 用DSS構(gòu)建不同類型的腸炎模型
模型 | 建模樣本 | 造模方案 | 造模結(jié)果 | 使用評(píng)價(jià) |
急性結(jié)腸炎 | BALB/c小鼠，雌，6-8周，25 g | 3%-5% DSS連續(xù)自由飲用7天 | Day5出現(xiàn)，結(jié)腸長(zhǎng)度縮短、HE染色，炎癥明顯 | 成模速度快，用時(shí)短。符合急性結(jié)腸炎模型特征 |
C57BL/6小鼠，雄，8周，20 g | 3%-5% DSS灌胃，持續(xù)給藥 | Day5出現(xiàn)，結(jié)腸長(zhǎng)度縮短、體重下降、便血、拉稀 | 成模率高，用時(shí)短。符合急性結(jié)腸炎模型特征 | |
慢性結(jié)腸炎 | C57BL/6小鼠，雄，8周，22 g | 1-2% DSS灌胃，持續(xù)給藥 | Day40出現(xiàn)，結(jié)腸長(zhǎng)度縮短、體重下降、便血、拉稀 | 成模率高。符合慢性結(jié)腸炎模型特征 |
結(jié)腸癌 | C57BL/6小鼠，雄，8周，21 g | 1%-2% DSS自由飲用5天，持續(xù)3周 | 14周 出現(xiàn)，結(jié)腸長(zhǎng)度縮短、體重下降、HE染色，炎癥明顯 | 成模率高。符合結(jié)腸癌模型特征 |
常見(jiàn)問(wèn)題
(點(diǎn)擊查看詳情-產(chǎn)品FAQs)
無(wú)論急性DSS結(jié)腸炎模型還是慢性DSS結(jié)腸炎模型，腸炎嚴(yán)重程度與成功與否均與小鼠種屬（不同基因背景）、DSS濃度、給藥周期等相關(guān)。
表5. DSS結(jié)腸炎造模常見(jiàn)問(wèn)題
可能出現(xiàn)的問(wèn)題 | 可能的原因 | 建議解決辦法 |
小鼠致死率高 | DSS濃度太高 | 降低DSS給藥濃度 |
小鼠無(wú)腸炎癥狀或低腸炎癥狀 | DSS濃度太低 | 升高DSS給藥濃度；減少循環(huán)間隔時(shí)間（10-14天） |
同一組小鼠，腸炎癥狀差異大 | 瓶蓋堵塞 | 每天檢查小鼠飲水瓶 |
產(chǎn)品訂購(gòu) 熱賣產(chǎn)品，建模效率與進(jìn)口產(chǎn)品一致，產(chǎn)品價(jià)格低至進(jìn)口價(jià)格的1/3，大量現(xiàn)貨庫(kù)存。
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） | 價(jià)（元） |
Dextran Sulfate Sodium Salt（DSS） 結(jié)腸炎建模用葡聚糖硫酸鈉鹽 MW:36000~50000 | 60316ES25 | 25 g | 1255.00 | 955.00 |
Dextran Sulfate Sodium Salt（DSS） 結(jié)腸炎建模用葡聚糖硫酸鈉鹽 MW:36000~50000 | 60316ES60 | 100 g | 3855.00 | 2655.00 |
Dextran Sulfate Sodium Salt（DSS） 結(jié)腸炎建模用葡聚糖硫酸鈉鹽 MW:36000~50000 | 60316ES76 | 500 g | 16855.00 | 9655.00 |
Dextran Sulfate Sodium Salt（DSS） 結(jié)腸炎建模用葡聚糖硫酸鈉鹽 MW:36000~50000 | 60316ES80 | 1 kg | 32855.00 | 18655.00 |
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