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實(shí)驗(yàn)原理ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法(圖a)、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接
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實(shí)驗(yàn)原理DNA是一切生物細(xì)胞的重要組成成分，主要存在于細(xì)胞核中。通過(guò)研磨和SDS作用破碎細(xì)胞；苯酚和氯仿可使蛋白質(zhì)變性，用其混合液（酚：氯仿：異戊醇）重復(fù)抽提，使蛋白質(zhì)變性，然后離心除去變性蛋白質(zhì)；RNase降解RNA，從而得到純凈的DNA分子。實(shí)驗(yàn)試劑1．生理鹽水2．十二烷基硫酸鈉（SDS）3．三羥甲基氨基甲烷（Tris）4．乙二胺四乙酸（EDTA）5．飽和酚6．氯仿7．異戊醇8．無(wú)水乙醇9．75%乙醇10．蛋白酶K11．RNase酶（試劑配制1．Tris–HCL1mol/LPH8.050ml
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實(shí)驗(yàn)試劑1.5x樣品緩沖液（10ml）:0.6ml1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml50％甘油，2ml10％的SDS，0.5ml巰基乙醇，1ml1％溴酚藍(lán)，0.9ml蒸餾水?？稍?℃保存數(shù)周，或在－20℃保存數(shù)月。2.凝膠貯液：在通風(fēng)櫥中，稱(chēng)取丙烯酰胺30g，甲叉雙丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。過(guò)濾后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1個(gè)月。3.pH8.9分離膠緩沖液：Tris36.3g，加1mol/LHCl48ml，加重蒸水80ml使其溶解，調(diào)pH8.9，
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實(shí)驗(yàn)原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA實(shí)驗(yàn)）本實(shí)驗(yàn)使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（AgaroseGelDNAPurificationKit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了*的凝膠融解系統(tǒng)，結(jié)合DNA制備膜技術(shù)，具有、快速、方便的特點(diǎn)，全套操作只需30min便可完成。使用該試劑盒每次可純化得到多至10μg的DNA片段（100bp～30kb），回收率高達(dá)50～80%。本試劑盒回收純化的DNA片段純度高，完整性好，可直接
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實(shí)驗(yàn)原理若將可溶性的鼻疽抗原吸附在比其體積大千萬(wàn)倍的紅細(xì)胞表面上，使紅細(xì)胞產(chǎn)生一種新的血清學(xué)性質(zhì)，制成所謂的致敏紅細(xì)胞，即可用以診斷鼻疽。只要與少量相應(yīng)抗體相遇，紅細(xì)胞通過(guò)抗原抗體反應(yīng)，即可被動(dòng)地結(jié)合在一起，呈現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，陰性者紅細(xì)胞由于自然沉積于孔底，則呈圓點(diǎn)狀。這樣可以明顯地提高反應(yīng)的敏感性。間接血凝試驗(yàn)即間接紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，它也存在一些缺點(diǎn)，例如不同批次制備的抗原或紅細(xì)胞，在敏感性和穩(wěn)定性方面，可能不一致，它很容易受外界因素的影響，發(fā)生非特異性凝集，所以應(yīng)用的器皿等就應(yīng)當(dāng)清潔，不
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實(shí)驗(yàn)試劑三氯、石蠟。實(shí)驗(yàn)設(shè)備剪刀，分析天平，稱(chēng)量皿（或鋁盒），烘箱，刀片，金屬（有機(jī)玻璃也可）模板（或打孔器），紗布，夾子，有蓋搪瓷盤(pán)，錫紙等。實(shí)驗(yàn)材料生長(zhǎng)于田間的植株。實(shí)驗(yàn)步驟1．選擇測(cè)定樣品：實(shí)驗(yàn)可在晴天上午8~9點(diǎn)鐘開(kāi)始，預(yù)先在田間選定有代表性的葉片（如葉片在植株上的部位、年齡、受光條件等）10張，掛牌編號(hào)。2．葉子基部處理，目的是將葉子輸導(dǎo)系統(tǒng)的韌皮部破壞：1)棉花等雙子葉植物，可用刀片將葉柄的外皮環(huán)割約0.5cm寬，切斷韌皮部運(yùn)輸。2)小麥、水稻等單子葉植物，由于韌皮部和木質(zhì)部難以分開(kāi)
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一、芯片制備基因芯片的制備主要有兩種基本方法，一是在片合成法，另一種方法是點(diǎn)樣法。在片合成法是基于組合化學(xué)的合成原理,它通過(guò)一組定位模板來(lái)決定基片表面上不同化學(xué)單體的偶聯(lián)位點(diǎn)和次序。在片合成法制備DNA芯片的關(guān)鍵是高空間分辨率的模板定位技術(shù)和固相合成化學(xué)技術(shù)的精巧結(jié)合。目前，已有多種模板技術(shù)用于基因芯片的在片合成,如光去保護(hù)并行合成法、光刻膠保護(hù)合成法、微流體模板固相合成技術(shù)、分子印章多次壓印原位合成的方法、噴印合成法。在片合成法可以發(fā)揮微細(xì)加工技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，很適合制作大規(guī)模DNA探針陣列芯片，實(shí)
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實(shí)驗(yàn)試劑1.PBS（Dulbecco）：0.10g/L無(wú)水CaCl20.20g/LKCl0.20g/LKHPO40.10g/LMgCl2.6H2O8.00g/LNaCl2.16g/LNaH2PO4.7H2O調(diào)pH至7.42.生長(zhǎng)培養(yǎng)基：不含谷氨酰胺的RPMI1640培養(yǎng)基10%FBS慶大霉素（可不用）（10μg/ml）2mmol/LL-谷氨酰胺1mmol/L丙酮酸鈉3.促細(xì)胞分裂劑（終濃度）5μg/mlPHA：1mg/ml母液-20℃分裝凍存25μg/ml刀豆凝集素A（conA）：0.4mg/m
