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TRIzolRNA提取試劑盒是由GIBCOBRL公司推出提取RNA的產(chǎn)品，其操作方便、快捷。在TRIzol中，RNA是隔離在RNA酶污染之外的。而對樣品的后續(xù)操作會要求用無RNA酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在150°C的烘箱中烘烤4小時。塑料器皿可以在0.5MNaOH中浸泡10分鐘，用水*漂洗干凈后高壓滅菌備用。（一）試劑準(zhǔn)備1．TRIzol試劑。2．氯仿3．異丙醇4．75%乙醇（DEPCH2O配制）5．DEPCH2O（二）操作步驟1．樣品處理：（1）培養(yǎng)細(xì)胞：收獲細(xì)胞1-5×
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DNA實驗技術(shù)：質(zhì)粒DNA限制性酶切圖譜分析
一、DNA的限制性酶切實驗原理核酸限制性內(nèi)切酶是一類能識別雙鏈ＤＮＡ中特定堿基順序的核酸水解酶，這些酶都是從原核生物中發(fā)現(xiàn)，它們的功能猶似高等功物的免疫系統(tǒng)，用于抗擊外來ＤＮＡ的侵襲。限制性內(nèi)切酶以內(nèi)切方式水解核酸鏈中的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生的ＤＮＡ段５’端為Ｐ，３’端為ＯＨ。1.限制性內(nèi)切酶的類型根據(jù)限制酶的識別切割特性，催化條件及是否具有修飾酶活性可分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三大類。*類（I型）限制性內(nèi)切酶能識別專一的核苷酸順序，它們在識別位點很遠(yuǎn)的地方任意切割DNA鏈，但是切割的核苷酸順序沒有專一性，是隨 -
相關(guān)專題引物設(shè)計載體名稱上游引物（5'primer）下游引物（3'primer）P3*FLAG-CMVCMV-30（825-854）CMV-24（1129-1152）pAc5.1/V5-His（_A,_B,_C）pAc5-5BGHrevpAcG2TpGEX-5notavailablepACTT7EEVT3/EBVrevpACT2GAL4ADforpGAL4-ADrvpACT2p17110p12584pACYC184（BamHI-site）PBRforBamPBRrevBampAC
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【DNA原位雜交技術(shù)】 熒光原位雜交（FISH）探針的制備及其應(yīng)用
zui近有一些戰(zhàn)友對熒光原位雜交技術(shù)比較感興趣，我整理了相關(guān)資料和自己的心得，和大家交流一下。不妥之處，請大家指出，共同討論學(xué)習(xí)。內(nèi)容分三部分：一、概述1.克隆性染色體異常是腫瘤的特征2.染色體異常常見的類型3.染色體異常的檢測方法二、熒光原位雜交及其探針1.熒光原位雜交的原理2.熒光原位雜交的探針三、熒光原位雜交探針的制備和熒光原位雜交（按試驗流程介紹）一、概述1.克隆性染色體異常是腫瘤的特征1914年德國遺傳學(xué)家Boveri就提出染色體畸變與腫瘤起源相關(guān)，然而這還僅僅只是一個假說；1960年 -
動物實驗基礎(chǔ)知識系列：飼料、飲水及飼養(yǎng)環(huán)境
做動物實驗，zui先要做的事情就是要養(yǎng)好動物。掌握好動物飼料、飲水及其生活環(huán)境，這對于動物實驗的成功是zui基本的保證。這是看似一個平常，但卻有著不少細(xì)節(jié)的問題。為了本版廣大站友能在整體上提高對實驗動物飼養(yǎng)的認(rèn)識，做好動物實驗的*步，特此開設(shè)本貼討論動物飼養(yǎng)的問題。希望大家能踴躍參與，以更多的實例來充實、豐富本貼。擬分以下幾個方面來討論：實驗動物的選擇概述實驗動物如何辨雌雄實驗動物的適應(yīng)性飼養(yǎng)實驗動物的飼料（普通飼料、特殊飼料）實驗動物的飲水實驗動物的籠具實驗動物的墊料實驗動物的飼養(yǎng)環(huán)境實驗動物 -
標(biāo)簽：變性聚丙烯酰胺凝膠電泳本方法由于快捷、簡便及具髙分離度，對純化寡核苷酸非常有用。盡管得到率偏低（＜50%），回收的量通常卻大大超過了大多數(shù)分子生物學(xué)應(yīng)用所需的量步驟亦可用于分離小RNA或其他單鏈多聚核苷酸。實驗方法基本方法實驗材料核苷酸試劑、試劑盒濃氨水TBE丙烯酰胺亞甲雙丙烯酰胺TEMED尿素過硫酸銨TE儀器、耗材真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀電泳儀實驗步驟1.用濃氨水將合成的寡核苷脧從可控孔度玻璃拄上洗脫下來。于55℃加熱5h以上。2.樣品移至離心管中，在Speedvac真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中凍干，沉淀用0
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標(biāo)簽：DNA印跡雜交雜交分析的原理是特定序列的單鏈DNA分子（即通常標(biāo)記的“探計”）可與另一個固定了的具有互補序列（“靶”序列）的DNA分子或RNA分子形成堿基配對，雜交分子的穩(wěn)定性取決于發(fā)生堿基配對的程度，這一技術(shù)可檢測復(fù)雜基因組中的單拷貝基因。實驗方法放射標(biāo)記法實驗方法原理本方案適合于用100~1000bp長的放射性標(biāo)記的DNA探針對Southern轉(zhuǎn)印、斑點及狹線印跡進行雜交分析。實驗材料DNA試劑、試劑盒SDSSSC儀器、耗材水浴鍋培養(yǎng)箱實驗步驟1.用6×SSC潤濕帶有固定了的DNA的膜
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標(biāo)簽：Southern印跡Southern印跡法是將DNA段從電泳凝膠中轉(zhuǎn)移至膜支持物上，使DNA段固定，因此該膜半*性地重現(xiàn)出凝膠電泳的帶型。實驗方法印跡法堿性緩沖液法向下毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法電轉(zhuǎn)印法實驗方法原理本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設(shè)計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料DNA試劑、試劑盒HClNaClTrisNaOHSSC溴化乙錠儀器、耗材電泳儀紫外透射儀實驗步驟一、向上毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法的轉(zhuǎn)移疊層系統(tǒng)：圖一、向上毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法的轉(zhuǎn)移疊層系統(tǒng)，A表示海
