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細胞技術(shù)專題：體外細胞的原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇
一、實驗原理細胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。直接從體內(nèi)獲取的組織細胞進行培養(yǎng)為原代培養(yǎng)；當原代培養(yǎng)的細胞增殖達到一定密度后，則需要做再培養(yǎng)，即將培養(yǎng)的細胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉(zhuǎn)移到另一個或幾個容器中擴大培養(yǎng)，為傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)的累積次數(shù)就是細胞的代數(shù)。細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以zui大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或DMSO作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少 -
一、實驗?zāi)康?、掌屋凋亡細胞的形態(tài)特征2、學會用熒光探針對細胞進行雙標記來檢測正?；罴毎⒌蛲黾毎蛪乃兰毎姆椒ǘ?、實驗原理細胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發(fā)生事件的組合，是細胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學和生物化學特征。在形態(tài)上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸，細胞變園，細胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀
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一、試驗?zāi)康?．掌握片劑溶出度的測定方法2．能正確使用溶出度測定儀二、實驗指導(dǎo)片劑等固體制劑服用后，在胃腸道中要先經(jīng)過崩解和溶出兩個過程，然后才能透過生物膜吸收。對于許多藥物來說，其吸收量通常與該藥物從劑型中溶出的量成正比。對難溶性藥物而言，溶出是其主要過程，故崩解時限往往不能作為判斷難溶性藥物制劑吸收程度的指標。溶解度小于0.1～1.0(g/L)的藥物，體內(nèi)吸收常受其溶出速度的影響。溶出速度除與藥物的晶型、顆粒大小有關(guān)外，還與制劑的生產(chǎn)工藝、輔料、貯存條件等有關(guān)。為了有效地控制固體制劑質(zhì)量，除
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1．檢品溶液的制備：取五倍子（含可水解鞣質(zhì)），兒茶（含縮合鞣質(zhì)），沒食子酸（鞣質(zhì)水解產(chǎn)生偽鞣質(zhì)）少量（約0.1克）分別置大試管中，加蒸餾水約10ml，加熱煮沸，過濾，濾液作以下試驗：2．鞣質(zhì)的一般反應(yīng)（鞣質(zhì)與偽鞣技的區(qū)別鑒定）（1）感觀試驗：取制備的鞣質(zhì)和偽鞣質(zhì)溶液，嘗其味，并以石蕊試紙檢查溶液是否呈酸性反應(yīng)。（2）三氯化鐵反應(yīng)：取制備的鞣質(zhì)溶液（五倍子溶液或兒茶溶液）及偽鞣溶液（食子酸溶液）各1~2ml，分別加入三氯化鐵試液,鞣質(zhì)產(chǎn)生綠色或蘭黑色反應(yīng)或沉淀;偽鞣質(zhì)產(chǎn)生蘭色反應(yīng)。（3）沉淀蛋白反
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1．外觀性狀：（1）取各種揮發(fā)油（松節(jié)油、薄荷油、丁香油、陳皮油及桂皮油）觀察其色澤，是否有特殊香氣，及辛辣燒灼味感。（2）揮發(fā)性：取濾紙屑一小塊，滴加薄荷油一滴，放置2小時或微熱后觀察濾紙上有無清晰的油跡（與菜油作對照實驗）。（3）pH檢查：（檢游離酸或酚類）。取樣品一滴加乙醇5滴，以預(yù)先用蒸餾水濕潤的廣泛pH試紙進行檢查，如顯酸性，示有游離的酸或酚類化合物，剩下的樣品乙醇液供下面（7）（8）試驗用。（4）FeCl3反應(yīng)（檢酚類）：取樣品一滴，溶于1ml乙醇中，加入1%得FeCL3醇液1~2滴
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1．檢品溶液的制備：1）取皂角碎塊1g于大試管（或小燒杯）中，加蒸餾水15ml，于30~90°水浴上浸漬15分鐘后過濾，濾液供鑒別用。2）取薯蕷碎塊0.5g加上法同樣制備得薯蕷水浸液。3）取薯蕷碎塊0.5g于大試管或小錐形瓶中加95%乙醇10ml于水浴上溫浸15分鐘，濾液供鑒別。2．鑒別試驗：（1）溶血試驗：取濾紙片一小塊，于小心處滴加皂角浸液一滴，待干后于同處再滴加一滴，如是反復(fù)操作至滴加數(shù)滴，干燥后無噴霧血球試液（取牛血、羊血或兔血一份，用玻棒或棉簽攪和，除去凝集的血蛋白，加pH7.4磷酸鹽
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1．檢品溶液的制備：取夾竹桃葉碎塊粉末3g，于100ml錐形瓶中加70%乙醇40ml，水浴上浸煮5分鐘，放冷，過濾，濾液（或經(jīng)處理后--方法參照注二）供鑒別用。[注1]：強心苷的試驗都是在較強的堿性條件下進行，如果樣品中含有蒽醌，也具有紅色反應(yīng)，防礙檢查，因此在檢查前需先檢查有無蒽醌類成分，若有則應(yīng)先將其除去，即將乙醇浸液在水浴上蒸發(fā)，殘渣加CHCl3熱溶后過濾，CHCl3液用1%NaOH液振搖，去除蒽醌后，CHCl3液供鑒別用。[注2]：夾竹桃葉或毛地黃葉綠素，常使醇提液帶較深的綠色，影響反應(yīng)
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1．檢品溶液的制備：取大黃粉末2克，加乙醇20ml，在沸水浴上回流浸提10分鐘，過濾供鑒別用。2．鑒別試驗：（1）與堿成鹽顯色反應(yīng)（Borntrager反應(yīng)）：取1ml乙醇提取液，加入1ml10%NaOH溶液，如產(chǎn)生紅色反應(yīng)，加入少量30%過氧化氫液，加熱后紅色不褪，加酸使呈酸性時，則紅色消褪再堿化又出現(xiàn)紅色。注：或取大黃粉末少許，置小試管中，加水1~2ml，加濃H2SO42-3滴，置水浴中加熱10分鐘，冷卻，加乙1-2ml振搖。用吸管吸取醚液（黃色）于另一潔凈試管中，加入NaOH試液1ml振搖
