久久久久亚洲精品男人的天堂,日本韩国男男作爱GAYWWW,特黄AAAAAAA片免费视频,av天堂电影网

上海北諾生物科技有限公司

中級會員·14年

聯(lián)系電話

15800960770

您現(xiàn)在的位置: 首頁> 技術(shù)文章 > 微生物學(xué)技術(shù):PCR法檢測支原體
中級會員·14年
聯(lián)人:
周經(jīng)理 劉經(jīng)理
話:
021-57730393
機:
15800960770
真:
86-021-61496710
址:
上海市徐匯區(qū)宜山路520號中華門大廈18樓D座
化:
www.bnbiotech.com
網(wǎng)址:
www.bnbiotech.com

掃一掃訪問手機商鋪

微生物學(xué)技術(shù):PCR法檢測支原體

2014-8-14  閱讀(1387)

分享:

PCR法是20世紀80年代中期建立起來的一種體外DNA擴增技術(shù),其基本原理是酶促DNA合成反應(yīng),即在DNA模板、引物和脫氧核糖核酸存在下,經(jīng)DNA聚合酶的作用,使DNA 鏈擴增延伸。該方法具有靈敏度高、特異性強、快速的特點,但其對實驗環(huán)境的要求嚴格,實驗成本較高,有時還有假陽性的現(xiàn)象出現(xiàn)。

1、儀器設(shè)備

超凈工作臺、PCR儀、電泳儀、凝膠成像分析系統(tǒng)、臺式離心機、旋渦混懸器等。

2、實驗試劑

選用美國Stratagene公司生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒(內(nèi)有引物、陽性對照、內(nèi)對照、StrataClean resin、緩沖液),dNTP,TapDNA聚合酶,緩沖液,瓊脂糖,礦物油。

3、實驗操作

PCR反應(yīng)的前期操作應(yīng)在無菌環(huán)境中進行。

(1)樣品的收集:待測細胞用抗培養(yǎng)基培養(yǎng)7d,用無菌容器取上清液500ul,4℃保存待測。

(2)模板的制作:在無菌的條件下,取細胞培養(yǎng)上清100ul于一無菌的0.5ml塑料離心管內(nèi),蓋好蓋子,95℃水浴加熱5min。

(3)打開蓋子,向管內(nèi)加StrataClean resin10ul,蓋好蓋子,旋渦混懸器混合,離心5—10s,吸取上清至一新的塑料離心管中,模板制作完畢,4℃保存。

(4)PCR反應(yīng):反應(yīng)體系zui適條件為:10mmol/lTris-HCL(pH8.38);50mmol/lHCL;1.5-2.5mmol/lMgCL2;200umol/ldNTP;2UDapDNA聚合酶。總反應(yīng)體系為50ul,反應(yīng)用去離子水均需用12000uw/cm2紫外燈照射。反應(yīng)如下表:

 表 反應(yīng)程序

      程   序   循   環(huán)溫度/℃       時間/min
  942
11502
  722
  941
240501
  722


①在0.5ml塑料離心管中加入35.2ul去離子水及5ul*10Taq反應(yīng)緩沖液。

②依次加入下列成分:0.4uldNTPs(25mmol/l),0.4ulTaqDNA聚合酶(5U/ul),2ul引物。

③加2ul去離子水,總體積45ul。

④加2ul已制成的模板到反應(yīng)體系中。

⑤陽性對照,內(nèi)對照各5ul加入到各自的反應(yīng)體系中。

⑥取一支含有以上反應(yīng)體系的離心管,加入5ul去離子水作為陰性對照管。

⑦在反應(yīng)體系中加入100ul礦物油。

(5)瓊脂糖凝膠電泳:PCR反應(yīng)結(jié)束后,進行瓊脂糖凝膠電泳,瓊脂糖凝膠濃度2%。電泳結(jié)束后,凝膠成像分析結(jié)果。

(6)結(jié)果分析:該方法為檢測支原體的定性方法,在電泳泳道上,MARKER、陽性對照、內(nèi)對照均會出現(xiàn)不同的電泳條帶,當被檢樣品泳道出現(xiàn)明亮條帶,且位置在陽性對照和陰性對照條帶位置之間,即可認為該樣品被支原體污染。有時還會發(fā)現(xiàn)一條泳道出現(xiàn)多條,可能是該樣品感染兩種以上支原體所致。如果泳道內(nèi)條帶隱約出現(xiàn),則可懷疑有支原體污染,重做該樣品。

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復(fù)您~
產(chǎn)品對比 二維碼

掃一掃訪問手機商鋪

對比框

在線留言
欧美激情四射在线视频| 国产一区中文字幕在线观看| 中文字幕久无码免费久久| 久久精品免视看国产成人| 亚洲中文字幕在线无码一区二区| 最美情侣国语版免费高清视频| 手机看片国产日韩 日韩欧美| 日本大一大二大三在一起读吗| 月夜影视在线观看免费完整版韩剧动漫| 免费A级毛片无码蜜芽欣赏网| 欧美日韩综合精品一区二区三区| 狠狠躁夜夜躁人人爽天天高潮| 国产一卡一卡三卡乱码| 亚洲男人天堂网1024| 边做边流奶水的人妻| 欧美一区二区精品在线观看| 麻花传媒MV国产免费观看视频| 欧美大屁股XXXX| 被义子侵犯的漂亮人妻中字| 左手影院日本高清完整版免费| 精品不卡一区二区| 加勒比无码一区二区三区| 麻豆亚洲AV成人无码久久精品| 欧美日韩美女一级片| 2018久久久国产精品| 久久久久亚洲AV片无码| 老熟女高潮一区二区三区| 精品无码一区二区三区电影| 秋霞网| 国产乱妇无码大片在线观看| 国产成人精品久久999| 男女男在线精品免费观看| 果冻传媒免费观看4399| 日韩精品视频一区二区三区| 欧美一区二区三区久久妇| 777色淫网站女女| 欧美日韩一区二区高清视| 发现老公与儿媳妇有暧昧怎么处理| 久久久久久亚洲精品中文字幕| 亚洲亚洲人成综合网络,| 久久久久久久黄色网|